医学检验技能操作.docxVIP

129 12 9 1、加稀释液 红细胞计数 取小试管 1 支，加红细胞稀释液 2ml。 2、加血 用清洁干燥微量吸管或一次性微量吸管采集末梢血或抗凝血 10ul，擦去管外余 血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管 2-3 次，立即混匀。 3、 充池 混匀后用微量吸管或玻璃棒将红细胞悬液充入计数池，室温下平放 3-5 分钟， 待细胞下沉后于显微镜下计数。 计数 计算 用高倍镜依次计数中央大方格内 4 角和正中 5 个中方格内的红细胞。 红细胞/L=N/200×10 /L N：表示 5 个中方格内数得的红细胞数。 白细胞计数 1、加稀释液 2、吸取血液 用吸管吸取白细胞稀释液 0.38ml 于小试管中。 用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血 20ul，擦去管尖外部余血，将吸管插入 小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管 2-3 次。 混匀 充池  将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液 1 滴，充入改良 Neubauer 计数板的计数池中，室温静置 2-3 分钟，待白细胞完全下沉。 计数 计算 在低倍镜下计数四角 4 个大方格内的白细胞总数。 白细胞=4 个大方格内白细胞数（N）/20×10 /L 白细胞分类计数 将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用。 镜下观察 低倍镜下观察白细胞的分布和染色情况。 观察 选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，按一定的方向顺序对所 见到的每 1 个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器作好记录，共计数 100 个白细胞。 计算 求出各类细胞所占的百分比率。 血涂片的制备和瑞氏染色 采血：用微量吸管在距载玻片一端 1cm 处加 1 滴抗凝血。 推片：左手平执载波片，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成 适当的宽度，立即将推片与载波片呈 30 度到 45 度角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适 宜的血涂片，血涂片应呈舌、头、尾三部分。 干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。 标记：在载玻片的一端用记号笔编号。 染色：血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置 于染色架上，滴加染液 3-5 滴，使其盖满血涂片，大约 1 分钟后，滴加等量或稍多的 II 液， 用吸耳球轻轻混匀。 冲洗：1 分钟后，用流水冲去染液，待干。 观察结果：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体尾交界处的血细 胞。 ABO 血型鉴定 （一）正定型法 5%被检红细胞生理盐水悬液制备 抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞 2 滴 于小试管中，加入生理盐水 2 ml ，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min 离心 3 分钟后弃去上清液，重复洗涤三次后自管底吸取 1 滴血红细胞加入 19 滴生理盐水中， 此即为 5%的红细胞生理盐水悬液。 标记试管 取小试管 2 支，分别标记抗 A、抗 B。 加标准抗血清 分别加入抗 A、抗 B 标准血清各 1 滴于相应标记的试管中。 加入红细胞悬液 分别加入被检者 5%红细胞生理盐水悬液 1 滴于各试管中，混匀，立 即以 1000r/min，离心 1min。 观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红 细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集、再用低倍镜观察凝集强弱程度，如轻微凝集或不见凝 集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。 判断结果 （1）凝集结果判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无 凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。 （二）反定型法 分离血清 2500r/min，离心 3min，分离血清。 标记并加被检者血清 取小试管 3 支，分别标记 A、B、O 字样，于各管加入被检者血 清 1 滴。 加标准红细胞 按标记分别加入 5%的 A、B、O 型标准红细胞生理盐水悬液 1 滴，混匀， 立即以 1000r/min，离心 1min。 观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，肉眼观察有 无凝集，再用低倍镜观察。 判断结果 凝集结果判断标准：同正定型法。 网织红细胞计数 1、加染液 取煌焦油蓝生理盐水溶液 2 滴，再加入新鲜全血 2 滴，立即混匀，置室温下 15-20 分钟。 2、制备涂片  取 1 小滴制成薄血涂片，自然干燥。 观察 计数 计算 在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。 在油镜下计数至少 1000 个红细胞中的网织红细胞数。 网织红细胞分数数=计数的网红细胞数/1000 尿蛋白定性检查（加热乙酸法） 加尿液 取大试管 1 支，各加清晰尿液 5ml。 加热 倾斜试管下