方法选择和检测系统性能评价.ppt

第三章 方法选择与检测系统性能评价; 方法学评价 是通过实验途径来测定分析方法的性能指标，并评价其是否可接受。 方法学评价的目的在于评估该分析方法在稳定状态下具有的误差，并对这些误差做出判断，来决定该分析方法是否可以用于常规测定。 方法学评价内容，通常应包括： 精密度、准确度、检测限、生物参考区间和可报告范围等。;第一节 实验方法的选择 ;（一）决定性方法（definitive method） ;特 点;（二）参考方法（reference method）;（三）常规方法（routine method）;临床化学决??性方法、参考方法、常规方法;二、参考物的分级 ;1.一级参考物（原级参考物） 是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，且有证书。 用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为“二级参考物” 定值。;一级标准品的特点;SRM-927（70g/L牛血清白蛋白溶液）为测定蛋白的一级标准品;2. 二级参考物（次级参考物）;3. 校准物（校准品）;决定性方法 用途：评价参考方法及一级参考物;三、常规方法选择的原则 ;1. 适用性;（二）可靠性;四、常规方法的选择步骤 ;五. 定量测定的方法学比对;进行EP9-A2的准备和步骤： 1. 熟悉检测系统，熟悉评价方案。 2. 对整个过程进行质量控制。 3. 至少应有40份患者新鲜标本，这些标本应涵盖线性范围，不要收集对实验有干扰的标本。 4. 按标本号1、2、3、4、5、6、7、8测定一次，然后8、7、6、5、4、3、2、1测定一次，不同检测系统同时进行。 5. 剔除离群值，绘制散点图，建立线性回归方程。 6. 判断是否可接受。;六. 定性试验的方法学评价;（三）定性试验方法学比较 样本种类和数量 患者新鲜标本，稳定。阴性和阳性标本应分别在50例以上。 2. 实验过程 在常规条件下，10-20天完成。 3. 以符合率进行结果描述。; 量值溯源的目的，是让常规标本的检测结果得到和参考系列相同的测量值。;一、量值溯源的概念;二、参考物的量值溯源;三、误差的分类和表示;测定值、样本均值、真值和系统误差、随机误差的关系;比例系统误差;四、测量不确定度;第三节 检测系统性能评价;什么是检测系统？ 完成一个项目检测涉及的仪器、试剂、校准品、测定方法、质量控制、保养计划等的（规定）组合。;二、检测系统的评估方法;性能评价参考文件 美国临床和实验室标准研究院（CLSI）公布一系列与方法学评价相关的文件，如： EP5-A 精密度评价 EP6-A 线性评价 EP7-A 干扰实验 EP9-A2 方法比对 。。。。。。 必要时可以利用上述EP文件对我们的检测系统进行标准化的评估。;三、精密度评价 – 重复性试验;2. 基本方法 对同一材料分成数份试验样品，进行多次分析测定，一般为20次。 批内重复性： 20次测定，计算x、s、cv%。 批间重复性：一天内分数批重复20次测定，计算x、s、cv%。一般分5批每批作4次测定。cv%比批内大。 日间重复性：每天1次，重复20天，计算x、s、cv。其cv反映实际工作情况。cv比批间大。;3. 试验要点;EP5-A 精密度评价方案介绍;四、准确度的评价;比例系统误差;（三）回收试验;1. 基本步骤;2. 回收率计算 ;回收率接近100％ 分析不受基质影响。 无论在纯溶液还是复杂的基质环境中，分析方法的反应能力是一样的。（准确度不受影响） 回收率明显偏离100％ 分析明显受不同的基质影响。 在不同的基质环境下，分析方法的反应能力有明显差异。（准确度受影响） ;3. 试验要点;（四）干扰试验;2. 方法 基本与回收试验一样，但是加入的是疑有干扰或非特异性反应的物质。;3. 可疑干扰物的浓度 应达到病理标本的最高浓度值，在确证有影响后，还应确定使分析结果影响临床应用价值的最低干扰物质浓度值。;4. 被试验的物质： 可根据该方法的反应原理，提示出可能的干扰物，一般应考虑的是用高胆红素、溶血（血红蛋白）、脂浊、防腐剂、抗凝剂等进行试验。但干扰试验有一定的局限性，因为人们只能试验某些物质的影响，还有许多药物和食物成分可能有干扰。;五、检测限评价; 如果空白吸光度的波动服从正态分布规律，则95％空白吸光度：空白均值±2s空白 待测样品吸光度只有超过空白均值＋2s空白才被认为样品中有分析物 99.7％空白吸光度：空白均值±3s空白 待测样品吸光度只有超过空白均值＋3s空白才被认为样品中有分析物;如：某5μg/L