第二十章常用分子生物学技术原理与其应用.pptVIP

Cycle 3 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 25～30 次循环后，模板DNA的含量可以扩大100万倍以上。 目 录 PCR技术原理示意图 PCR扩增的特异性是由一对寡核苷酸引物所决定的。反应初期，原来的DNA担负起始模板的作用，随着循环次数的递增，由引物介导延伸的片段急剧增多而成为主要模板，最终的扩增产物是介于两种引物5 端之间的DNA片段。 模板DNA PCR技术对模板质和量的要求并不十分严格。 一般来说宜用ng量的克隆DNA，μg水平的染色体DNA作起始材料。 特异性引物 预扩增核酸片段两端的已知序列，决定特异性。 耐热DNA聚合酶（耐热Taq DNA聚合酶 ） dNTPs Mg2+ 缓冲液 水 PCR反应体系的基本组成成分 利用特异性引物以cDNA或基因组DNA为模板获得已知目的基因片段, 或与逆转录反应相结合，直接以组织和细胞的mRNA为模板获得目的片段； 利用简并引物从cDNA文库或基因组文库中获得序列相似的基因片段； 利用随机引物从cDNA文库或基因组文库中克隆基因。 二、PCR技术的主要用途 （一）目的基因的克隆 利用PCR技术可以随意设计引物在体外对目的基因片段进行嵌和、缺失、点突变等改造。 PCR技术高度敏感，对模板DNA的