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微囊藻毒素的检测方法及其展望 　　内陆水体富营养化的加剧引起了藻类大量繁殖，形 成日趋严重的水华污染。水华污染是淡水水体中危害最严 重的因素之一，所产生的微囊藻毒素（Microcystins，MC） 毒性较大，分布广泛，具有稳定的化学结构和生物活性， 是目前发现的最强的肝脏肿瘤促进剂之一。常规饮用水处 理技术并不能有效地脱除水体中的微囊藻毒素，微囊藻毒 素引起的野生动物、家禽和家畜等中毒或死亡的事件已有 许多报道，并通过生态系统、食物链对人类造成潜在的威 胁。由于 MC-LR 在微囊藻毒素中的毒性最大，并证实其有 促肿瘤作用，所以目前关于饮用水中藻毒素的限值都是以 MC-LR 为代表的。上世纪九十年代世界卫生组织（WHO） 在对饮用水质量基准的补充文件中规定微囊藻毒素- LR（游 离的和与细胞结合的） 的基准值为 0.001mg/L，我国在 2006 年修订并实施的《国家生活饮用水卫生标准》中已将 MCYST-LR 列为非常规监测项目，确定执行标准为 0.001mg/L。水体中藻毒素污染已成为一个全球性的环境问 题而日益受到人们的关注。 　　1 微囊藻毒素的特点 　　藻细胞破裂后会释放出多种藻毒素。一般认为它是由 肽合成酶复合体合成的生物活性小肽，具有环状结构及其 氨基酸的特殊结构。影响微囊藻毒素合成的环境因子较多， 主要的有光照、温度、pH 值和营养元素等。有研究结果表 明藻毒素是初级代谢产物，其主要作用是通过鳌合使进入 藻体内的重金属离子减轻毒性和抑制其它水生植物并促进 其本身的生长。不同藻毒素的功能还有待深入研究。 　　2 检测方法 　　国内在这方面的研究则相对集中在对 MC 的去除方法 上，在检测技术方面目前常用的检测方法主要有生物毒理 检测法、化学分析法和生化分析法。 　　2.1 生物毒理检测法：生物毒理检测法包括动物毒性法、 细胞毒性法。动物毒性法是将纯化的微囊藻毒素或水华蓝 藻中提取的藻毒素通过动物口服或注射来间接评价藻毒素 的毒性的一种方法。根据动物的生理病变及半致死剂量 （LD50）可初步确定藻毒素的毒性，这也是毒理评价的常 用方法。除个别异构体的 LD50 为 200～250μg/kg 外，多 数微囊藻毒素的 LD50 为 60～70 μg/kg。动物毒理检测法 操作简单，但个体差别较大，并不能准确的判定藻毒素类 型及结构。因此动物毒理检测法通常只作为毒性检测的最 初筛选方法.另外还有利用毒素对细胞的毒性作用来检测的 方法是细胞毒性检测技术。这种技术既可以对毒素定性分 析还可以精确的定量。谷康定等用 2 步灌流法制备大鼠原 代肝细胞，经 MC-LR 处理后，数小时后细胞形态学即发生 改变，其灵敏度可达 μg/L 级。但该技术操作繁琐，基本上 处于初步研究阶段，目前较难大范围推广应用。 　　2.2 化学分析法：高效液相色谱是目前应用最广泛的方 法，具有较高的灵敏度和精密度，依据保留时间定性，一 次可以测定多种藻毒素。高效液相色谱可以分离纯化、定 性或定量检测微囊藻毒素。一般是先将样品通过固相萃取 吸附富集，溶剂淋洗后洗脱，用于定性、定量分析。另外 可采用色质联用或与核磁共振联用技术确定藻毒素的分子 式和结构。对于流动相，一般采用乙腈/水或甲醇/水体系的 不同浓度梯度淋洗，在水相中加入一定比例的三氟乙酸或 采用酸性的磷酸盐缓冲溶液以保持酸性（pH 约 2.5），用 C18 固相萃取柱对藻毒素进行分离。藻毒素的种类繁多，很 多情况下需要测定水体中总藻毒素的浓度。藻毒素均含有 侧链 ADDA 基团，而藻毒素的毒性与侧链 ADDA 基团密切 相关，ADDA 基团的最大吸收峰在 238nm 处，所以对 MC 的化学检测，常采用 HPLC/UV 法。 　　2.3 生化分析法：生化分析法有酶联免疫吸附法 （Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）和蛋白磷 酸酶抑制法（Protein phosphotase inhibition assay， PPIA）， 由于具有灵敏、快速、适用于分析大批样品等特点，显示 出良好的发展趋势。ELISA 是用制备的藻毒素多克隆抗体 测定藻毒素总量。日本 MBC 和美国等公司制备了单克隆抗 体的试剂盒，可以检测到 0.05～1.0 μg/L 的藻毒素浓度。 但因不同类型藻毒素的结构非常相似，因此，也不能识别 出藻毒素的特定类型，只能测定藻毒素的总量。PPIA 则是 利用微囊藻毒素对荧光物质蛋白磷酸酶 PP1 和 PP2A 活性专 一性的抑制效应进行定量分析，检测限可达 0.012～0.177μg/L 。蛋白磷酸酶抑制法常与放射性的 32P 或荧光剂结合使用，增加了测定操作与设备，而且藻细胞 内源磷酸酶的存在会增大测定误差。另外和酶联免疫吸附 法一样，