质粒dna提取原理步骤凝胶电泳分析及其应用.pptxVIP

质粒DNA提取的原理、操作步骤、琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用;;独立于细菌染色体外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子； 存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多．;质粒能自主复制，在细菌中不断复制自身。在细胞内的复制分成两种类型：一种是低拷贝数的质粒，每个细胞仅含有一个或几个质粒分子，这种类型称为“严谨型”复制的质粒；另一种是高拷贝数的质粒，拷贝数一般在20个以上，这种类型称为“松弛型”复制的质粒 质粒能编码一些遗传性状，如抗药性（如抗氨苄青霉素、抗四环素等），耐受重金属，产生细菌素等，被质粒转化的细菌也获得了这些额外的特性;碱裂解法 煮沸裂解 羟基磷灰石柱层析法 质粒DNA释放法 酸酚法等 ;分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤： 培养细菌使质粒扩增； 收集和裂解细菌； 分离质粒DNA;;☆原理示意图;操作步骤;;;;;菌体老化 碱裂解不充分 菌体中无质粒 溶液使用不当;混有蛋白 混有RNA 混有基因组DNA ; M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12;琼脂糖凝胶电泳的应用;;;;;;50mmol/L 葡萄糖 25mmol/L Tris·Cl(pH8.0) 10 mmol/L EDTA (pH8.0) 作用：分散细胞，鳌合金属离子使金属酶失活 注意：菌液一定悬浮均匀，不能有结块;0.2 mol/ L NaOH 1% SDS 作用：细胞壁肽聚糖在碱性下水解，核酸和蛋白质变性。 注意：时间勿太久，动作要温柔，轻轻颠倒几次;5mol/L 乙酸钾 60 ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml 作用：酸性条件下质粒DNA复性，变性蛋白-SDS＋线性DNA沉淀，Na＋可中和DNA 注意：复性时间不宜过长