酶的分离与纯化.pptxVIP

第四章 酶的分离与纯化一、酶的分离二、酶的精制三、电泳四、酶的浓缩五、酶结晶一般程序1. 预处理和固液分离：加速固液相分离2. 细胞破碎分离胞内产物3. 初步纯化（提取）：除去与目的产物性质差异很大的杂质4. 高度纯化（精致）：除去与产物性质相似的杂质5. 产品加工一、酶的分离（一）发酵液预处理目的：改变发酵液物理性质尽可能使产物转入便于后处理的某一相中去除部分杂质1、发酵液的相对纯化（1）无机离子的去除Ca2+ 常用草酸Mg2+ 三聚磷酸钠，生成可溶性络合物 Na5P3O10+Mg2+ =MgNa3P3O10+2Na+Fe3+ 黄血盐[K4Fe(CN)6],形成普鲁(Fe4[Fe(CN)6]3)沉淀 3K4Fe(CN)6+4Fe3+=Fe4[Fe(CN)6]3?+12K+(2)杂蛋白质的去除1）沉淀法 机理主要是破坏电荷。酸性溶液中与一些阴离子如三氯乙酸、水杨酸、苦味酸等形成沉淀。碱性溶液中与一些阳离子如Ag2+ Cu2+ Zn2+ Fe3+ Pb2+等形成沉淀2）变性法 蛋白质因变性导致溶解度下降而被除去。常见的如加热、大幅度调pH、加有机溶剂和表面活性剂等。3）凝聚和絮凝 用Al2(SO4)3等凝聚剂使蛋白质胶体体系不稳定，通过相互碰撞发生凝集。形成的颗粒较细。 絮凝作用是指在某些高分子絮凝剂（如聚丙烯酰胺类衍生物）的架桥作用下将胶体粒子交联成网，形成10mm