细胞培养方法及应用实例.pptxVIP

第二节 细胞培养方法及应用实例;一、动物细胞培养方法;⑵主要优点 细胞紧密黏附于固相表面，易更换培养液；易采用灌注培养，从而达到提高细胞密度的目的；因细胞固定表面，不需过滤系统；适用于所有类型细胞。 ⑶主要缺点 与悬浮培养法相比：扩大培养比较困难，投资大；占地面积大；不能有效监测细胞的生长。 ⑷细胞贴壁的表面 要求具有净阳电荷和高度表面活性。对微载体而言还要求具一定电荷密度；若为有机物表面，必须具有亲水性，并带阳电荷。;2.悬浮培养;3.固定化培养;⑵共价贴附法;二、植物细胞培养方法;;2.原生质体培养;3.花粉培养;三、细胞培养反应器;; 中空纤维反应器因其剪力小被广泛运用于动物细胞的培养。 中空纤维反应器主要由中空纤维管组成，中空纤维管的内径为200μm，壁厚为50～70μm。管壁是多孔膜，O2 和CO2等小分子可以自由透过膜扩散，动物细胞贴附在中空纤维管外壁生长，可以很方便地获取氧气。;3.固定化细胞培养设备;;问题思考与讨论;四、动物细胞工程应用实例;⑵甲型H1N1流感疫苗的生产流程;①原始种子——基因重组病毒株;②生产前准备;【接种、培养】;③病毒培养;; 病毒灭活液中有很多的杂质，必须加以纯化，以保留病毒作为疫苗的有效成分—抗原，去除病毒灭活液中的其它杂质，避免这些杂质对人体产生不良反应。病毒灭活液的浓缩纯化有多条路线可走。例如：; 抗体是由 B淋巴细胞分化形成的浆细胞合成、分泌的。每一个 B淋巴细胞在成熟的过程中通过随机重排只产生识别一个抗原的抗原受体基因。 动物脾脏有上百万种不同的 B淋巴细胞系，重排后具有不同基因不同的 B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别;;待融合用骨髓瘤细胞 （准备）;【抽取细胞液】 先将大鼠处死，并向其腹腔内注射10mLDMEM培养液，轻压腹腔使细胞悬浮，吸出全部细胞悬浮液。 【细胞分离】 离心分离5min，用0.1mol/L磷酸缓冲液（pH = 7.4）洗涤，收集细胞。 【细胞培养】 用10％小牛血清、100U/mL青霉素和链霉素、HAT的DMEM培养液制成悬浮，置于37℃ CO2 培养箱中进行温育。;②免疫大鼠脾淋巴细胞的制备;③待融合用大鼠骨髓瘤细胞的准备;层析;3.迷迭香抗氧化剂的生产;②迷迭香精油（ROSEMARY）;③迷迭香酸（Rosmarinic acid）;⑵迷迭香抗氧化剂的生产流程;;4.紫杉醇的生产; 主要功能：抑制真核细胞内蛋白质的合成，使多聚核糖体解聚，是干扰蛋白质合成功能的抗癌药物。 临床用于治疗急性早幼粒细胞白血病、急性单核细胞性白血病、急性粒细胞性白血病及恶性淋巴瘤等。 ;⑵紫杉醇的生产流程;问题思考