生化反应工程实验.pptVIP

枯草杆菌发酵动力学与;一．实验目; 二．实验原理;碱性磷酸酶碱性条件下，催化磷酸单酯水解。根据酶催化反应机理：;三．菌种、培养基、实验试剂与主要仪器;四．实验方法与步骤;3．枯草杆菌碱性磷酸酶酶液制备;酶促反应动力学研究;五．实验结果;2.底物浓度对酶反应速度影响——rmax与Km测定;3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖;△;取7支25ml刻度试管，编号，按下表操作。; 取10支试管为例，按表操作。将各管混匀后，测定各管光密度。用制作标准曲线中空白管溶液调零。;菌体量(CX) 测定：; 比浊法是根据菌悬液透光量间接地测定细菌数量。细菌悬浮液浓度在一定范围内与光密度成正比，所以可用比色计测定菌液光密度(OD值)表示样品菌液浓度。 具体操作：将培养0 h、1h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h 、4.5 h、5 h、5.5 h菌悬液摇匀后，于560nm波长下，测定0D值作为CX。用未接种培养基作空白对照。 ; 此法分为湿重法与干重法。干重法系单位体积培养物经过滤（或离心）后，在105℃烘箱中烘干至恒重（1～1.5hr），冷却至室温称重。 具体操作：先称取干燥滤纸重量，记为W1（g），取发酵液过滤，上清液保存于冰箱进行糖浓度测定，菌体与滤纸一起于105℃烘至恒重后称滤纸与菌体重量，记为W2（g），根据下式计算菌体生物量，单位 g/L。;[1] 郭勇编