普鲁卡因半数致死量ld50的测定.pptxVIP

普鲁卡因(LD50)的测定小组成员：周瑞琪、宋文欣、吴迪、车远、王楠特殊毒性试验（致畸、致癌、致突变）长期（慢性）毒性试验急性毒性试验：1～7d毒性试验半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表示。测定LD50意义 (1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数 TI=LD50/ED50 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物质危险划分为五个等级①“0”：无毒性，LD5015 g/kg；②“1”：实际无毒性，5 g/kgLD5015 g/kg；③“2”：轻度毒性，0.5 g/kgLD505 g/kg；④“3”：中度毒性，50 mg/kgLD50500 mg/kg；⑤“4”：高度毒性，LD5050 mg/kg普鲁卡因产生毒性作用的原理:普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭而死亡。 LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现多采用计算机程序计算。改良寇试法简便而计算较为精确。实验部分【实验目的】1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度。【实验材料】实验动物：小白鼠50只，体重18～２２g，♀♂各半。 实验器材：计算机、电子秤、注射器、小鼠笼。实验药品：1%普鲁卡因，苦味酸溶液（标记） 实验小鼠选择1.体重相近（20±2g）。2.健康，雌雄各半。3.怀孕雌鼠剔除不用。随机原则随机原则：是指在抽样时排除主观上有意识地抽取调查单位，每个受试单位以概率均等的原则，随机地分配到实验组与对照组。【随机】小鼠随机分组处理1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入一笼。（18.19.20.21.22）2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性别体重小鼠均匀分配于各组。分组方式：组号1* 2* 3* 4* 5*鼠号1 2 3 4 5 5 1 2 3 4 4 5 1 2 3 3 4 5 1 2 2 3 4 5 1 ……【实验步骤】1. 按剂间比1：0.85，腹腔注射1%普鲁卡因，5组剂量分别为130mg/kg,153mg/kg,180mg/kg,212mg/kg和249mg/kg。2.观察30min统计小鼠死亡数。3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50和95%可信限。抓好后将小鼠保持头低位计算LD50及其95%可信限改良寇试法Bliss法改良寇试法基本要求1.反映情况符合或接近对数正态分析。2.相邻两计量比值相等。3.各组动物数相等或相近。4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最好再80%~120%范围内。改良寇试法计算LD501. 最小剂量组死亡率0%，最大剂量组死亡率100%：LD50=lg-1（Xm-i（Σp-0.5））p ——各组动物死亡率Xm——最大剂量的对数i ------相邻两组对数剂量差值改良寇试法2. 0%最小剂量组死亡率30%，或70%最大剂量组死亡率100%时：LD50=lg-1[Xm-i(Σp-(3-Pm-Pn)/4)]Pm------剂量最大组死亡率Pn-------剂量最小组死亡率改良寇试法3.标准物SlgLD50=i√[(Σp-Σp2)/(n-1)]4.LD50的95%可信区间Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)Bliss法传统计算方法Bliss法采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤：启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再进入半数有效量选项。一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。单击“计算”按钮，计算LD50等参数。相关软件spass，sas，还有专门LD50数据处理程序。【注意事项】给药从中剂量组开始。动物的饥