生物化学 第二章 核酸化学.pptVIP

第二章;本章内容;第一节 核酸的发展历史及研究现状 ;核酸化学研究史（1）;核酸化学研究史（2）;核酸化学研究史（3）;核酸化学研究史（4）;第二节 概述;分布： ;三、核酸的组成;核苷酸的基本结构;腺苷酸;（一）核酸中的戊糖;（二）碱基;一、核苷酸;腺嘌呤;在生理pH下，在生物体内，碱基多以亚氨基、酮式存在。;3、稀有碱基：;（三）核苷：(nucleoside);核苷的表示：;（四）核苷酸(nucleotide，nt);2、结构：;3、表示：;4、特殊核苷酸：;2）核苷多磷酸和寡核苷多磷酸：;一、核苷酸的连接方式;3’-, 5’磷酸二酯键;二、核酸的一级结构：;1）一级结构表示方法如下：;2）读向： ; 由数量庞大的4种脱氧核苷酸通过3’-, 5’磷酸二酯键连接成的直线形或环形多聚体。;三、DNA的双螺旋二级结构;Watson-Crick的DNA双螺旋;34;DNA中的四种碱基及它们间的氢键;双螺旋中的碱基对（base pair,bp);2,双螺旋结构的特点:(Watson-Crick模型）;2）结构：;3）尺寸：;4）双螺旋的稳定性：;3、二级结构的构象类型：;;B-DNA与A-DNA;几种DNA钠盐的特点 ：;H-DNA: 三条链局部螺旋;四、DNA的三级结构;1、超螺旋结构;48;正螺旋和负螺旋;2、核小体中的  扭曲方式;五、DNA的功能;1）原核生物基因组：;C、基因有重叠； 同一核苷酸顺序中包含多种生物信息。;2）真核生物基因组：;;内含子与外显子;2、DNA是遗传信息的载体;3、DNA是变异的物质基础;六、RNA;（二）RNA的类型;此外，在真核细胞中还有少量：;1、tRNA;1）tRNA结构：;tRNA 三级结构 为倒L型;A、在pr合成中转运aa； B、在pr合成的起始、DNA反转录合成及其它代谢调节中起作用。;2、mRNA和hnRNA;RNA转录自DNA;合成mRNA;切除内含子;2) mRNA结构特点：;3) 功能：是蛋白质合成的模板;3、rRNA;;4、RNA的功能;75;第四节、核酸的性质;5、颜色反应：;二、紫外吸收性质;2、确定所提取的核酸是否纯品。 1）DNA： ≈1.8 纯品 OD260/OD290 ＞ 1.8 RNA 污染 ＜ 1.8 pro 污染 2）RNA： OD260/OD290 ≈2.0 纯品;3、紫外可使相邻T T间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体，引起基因突变。;三、核酸结构的稳定性;四、核酸的变性;2）结果：A、增色效应： 260nm紫外吸收增加； B、粘度下降、浮力密度上升； C、生物学性能部分或全部丧失。 3）引起变性的因素： 温度、pH、尿素、甲醛等。;2、热变性与Tm;3、影响Tm的因素：;DNA分子的Tm与GC含量的关系;盐浓度对DNA变性的影响;五、核酸的复性;DNA变性与复性;第五节、分子生物学技术;2)探针（probe);上：探针标记 右：放射自显影;93;二、限制性内切酶：;2、水解酶：水解磷酸二酯键;3、限制性内切酶;粘性末端;应用于克隆、测序、检测DNA等;DNA凝胶电泳;三、 Southern印迹法;Northern blot：用于检测RNA Western blot：用于检测蛋白质;四、聚合酶链  式反应（polymeerase chain reaction, PCR);原理： 碱基配对； 聚合酶可催化在试管内合成与模板互补的 DNA新链； 双脱氧核苷酸无3’-OH，合成到此终止； 可电泳分离随机得到的大小不等的片段。;核酸序列测定;Bye Bye