盐溶蛋白电泳检测玉米种子纯度的操作技术.docVIP

盐溶蛋白电泳检测玉米种子纯度的操作技术 安徽农业科学.Journal0fAnhuiAge.Sci.2OO6.34(11).2344—2345责任编辑庆珞责任校对庆珞 盐溶蛋白电泳检测玉米种子纯度的操作技术 孟超敏,郑跃进,姬俊华2,马占强,刘素云,张念辉 (1.河南科技大学农学院,河南洛阳471003;2.洛阳大学环境与化学W程学院,河南洛阳471023;3.河南省汝阳县种子公司,河南汝阳4712OO) 摘要介绍了玉米种子盐溶蛋白电泳鉴定真伪及纯度的操作技术,并对该方法在实际应用中应参照的国标及存在的问题进行了分析和 探讨. 关键词玉米;电泳;品种纯度;操作技术 中图分类号$513文献标识码B文章编号0517—6611(20(~)11—2344—02 ProbehltotheKeyTodmiqueandProblemsinldlmtiflealioaofVarietyandAlUminaS MClmo-miaetal(AgriculturalCollege,HenanUniversityofScienceandTechnology,I.uoyang,Henan471003) AJasaactInthispaper,thekeytechniquesinthep~_edtaeofmaizeseedsalt—solubleproteinelectrophoresiswel,~clarified.Theproblemintheactual appraisalworkwereanalyzedanddiscussed. KeywordsMaize;Electrophoresis;Varietypurity;Keytechnique 品种纯度是种子质量的重要指标,品种纯度鉴定是种子 生产工作中不可缺少的重要环节.目前,品种纯度检测方法 有很多,主要有田间种植鉴定和室内检测_lJ.在诸多室内检 测方法中,电泳法是较为常用的方法[2.3],是近几年国际种子 检验协会(ISTA)推荐的几种比较可靠的方法之一_4],全国农 技服务中心组织全国11个省的质检机构连续3年的联合攻 关研究和完善,制订了玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定法 (№Y449—2001),该方法的制订与实施,填补了我国自行研 制种子生化测纯标准方法的空白,为我国玉米种子室内纯度鉴 定提供了重要手段_3jJ.因此在农科高年级学生专业实验课中 开设品种纯度电泳鉴定的操作实验非常必要.笔者介绍该方 法在实验中的操作技术,并分析在实际应用中存在的问题. 1操作技术【5-】 1.1溶液配制 1.1.1准备好合格的药品.所用化学试剂应为分析纯或 合格的化学纯,盐溶蛋白电泳法属生化方法,需用化学试剂 15种配置多种操作溶液,要注意化学试剂的纯度和质量,还 要注意个别试剂容易失效变质.如硫酸亚铁和抗坏血酸都 是还原性试剂,若放置时间过长或密封不好,很容易被氧化 变质,失去对凝胶的催化作用,导致凝胶不凝固或凝胶效果 不好;过氧化氢是凝胶形成的引发剂,它容易在高温或光照 下分解而变质;乳酸钠和乳酸溶液在高温下受到微生物的 作用而变质沉淀;凝胶溶液会在光照下发生聚合.因此,购 买试剂时应注意其产地,厂家,生产日期和密封情况.配制 好的溶液应装在棕色瓶中放冰箱低温保存,凝胶液应在14 d内使用,其他溶液可以保存60d. 1.1.2严格按配方配置溶液.在配置溶液时,应做到称量 准确.在称取极少量试剂(如;硫酸亚铁)时,可采用加倍称 取,稀释取用的方法,以减少称量误差;在用酸度计调节浓 缩胶缓冲液的pH值时,可用乳酸原液经稀释后再调节的方 法更为有效. 基金项目河南科技大学实验基金项目(SY0405047)和人才科学研究 基金项目(04055). 作者简介孟超敏(1977一),男,陕西成阳人,硕士,讲师,从事种子与 生物技术育种的教学及科研工作. 收稿日期2oo6o3-o7 1.2样品制备 1.2.1磨碎过程要仔细.样品磨碎时要注意,单粒样品磨 碎器要清理干净,如果用钳子代替单粒粉碎机粉碎种子时, 应垫上小片清洁的布或纸,防止交叉污染.磨碎时要特别 注意不能有样品散失,尤其是胚部不能丢失,因为胚部含油 分较高,在样品含水量高时,粉碎后的样品容易粘在单粒粉 碎机或白布上,这时一定要将其清理下来并与其他部分一 起放入离心管中.如果样品的水分高,可在40℃烘箱中烘 干1～2h,使水分达标后再进行粉碎.同时每粒种子粉碎 的程度或细度应基本一致,以保证各管样品提取蛋白质含 量基本一致. 1.2.2加人提取液要适量.单粒样品均匀粉碎后,在加人 提取液时,应注意尽量加人与样品同体积的量,特别是小种 子,如加人与大种子同量的提取液,则蛋白质浓度低,影响 电泳质量,谱带色淡,易错判. 1.3电泳操作 1.3.1胶室要清洗干净.