60Co诱变晋大78后代贮藏蛋白亚基相对含量的策略分析.docxVIP

60Co诱变晋大78后代贮藏蛋白亚基相对含量的策略分析 目前，世界上人类所得到的蛋白质　80％来源于植物蛋白，其中16％来源于大豆[1]。大豆是蛋白质含量最高的作物之一，栽培大豆蛋白质含量一般为40％左右，野生大豆中有的材料蛋白质含量高达55％[2]。大豆种子中的蛋白绝大部分为贮藏蛋白，主要是11S和7S球蛋白。因此，研究l1S和7S球蛋白就成为大豆蛋白质研究的主要内容。Kitamura等[3]和Davies等[4]对11S和7S组分的亚基进行遗传学研究，发现部分亚基是由显性基因控制的。研究表明，增加11S球蛋白的含量，降低7S球蛋白的含量，可以提高大豆蛋白的营养品质，调节11S和7S球蛋白的比例可以提高大豆的加工品质[5]。本研究以诱变后代为材料，对其大豆蛋白亚基相对含量进行检测分析，探讨诱变后代大豆品系的蛋白遗传特性和变异规律，为通过诱变育种筛选大豆优质品种提供理论基础和实践依据。 　　1　　　　材料和方法 　　1.1　　　　材　料 　　本试验所用的材料是山西农业大学选育的农艺性状好、品质优良的诱变亲本晋大78及其诱变后代：M3代。2009年利用60Co（剂量率为100　Rmin-1）对晋大78号的风干种子进行辐照处理，得到M1代共67份材料；2010年收获M2代后，2011年4月30日种植M2代与亲本晋大78，行长3　m，行距0.5　m，株距0.2　m，二行区，重复3次。在生长期间按照当地水平进行管理，及时中耕锄草，收获后统一进行大豆贮藏蛋白的电泳分析。  　　1.2　　　　方　　　法 　　1.2.1　　　　　贮藏蛋白的提取及电泳　　　　脱脂豆粉的制备：选取籽粒饱满的大豆种子去皮，置于无菌的三层滤纸间用小铁锤砸碎后放入研钵中研磨至粉末，分两份分别放入1.5　mL的离心管中，每管中加入1　mL乙醚脱脂过夜。脱脂结束后倒去上清液，风干后-20　℃保存备用。 　　贮藏蛋白的提取：1.0　g脱脂豆粉加20　mL　50　mmolL-1的Tris-HCl（pH值=8.0，含0.01　molL-1beta;-巯基乙醇）提取液，室温下提取1　h，离心（10　000　rmin-1，20　min，4　℃），取上清，用1　molL-1HCl调pH值至4.5，离心（10　000　rmin-1，15　min，4　℃），弃掉上清，得到沉淀，经低温干燥后得到大豆贮藏蛋白。 　电泳：采用不连续垂直板状凝胶电泳，凝胶厚度1　mm，浓缩胶浓度为5%，电流15　mA，分离胶浓度为12%，电流30　mA。用考马斯亮蓝R-250染色2　h，用蒸馏水漂洗2～3次，再用甲醇、冰醋酸溶液（甲醇∶冰醋酸∶水=1∶6∶3）在脱色摇床上脱色，直至各亚基条带清晰，最后7%冰醋酸固定。电泳完成后用TY4133型凝胶成像分析系统拍照。 　　1.2.2　　　　　数据分析　　　　蛋白谱带用TY4133型凝胶成像分析系统拍照，并用其自带的Quantity　One软件进行分析，各试验数据采用Microsoft　Office　Excel　2003及SAS　9.2软件进行分析。 e;，alpha;，beta;，A3，Acid，Basic和几条未命名的谱带，各条带在凝胶上可以清晰分辨，含量差异较大。 　　这与国外的两个SDS图谱中7S球蛋白的alpha;prime;、alpha;、beta;和11S球蛋白的酸性亚基及碱性亚基的带型位置完全吻合，进一步说明本试验的SDS图谱划分是正确的。 　　2.2　　　　晋大78及其诱变后代大豆球蛋白各亚基相对含量统计分析 　　由表1可知，人工诱变晋大78后代贮藏蛋白不同亚基含量变异较大，大豆7S球蛋白中的alpha;prime;，alpha;，beta;，gamma;和7S球蛋白总量平均数分别为9.84%，11.53%，12.64%，4.67%，42.11%；大豆11S球蛋白中的A3亚基、Acid亚基含量、Basic亚基和11S组分平均含量分别为7.56%，17.60%，25.95%，53.38%。由各亚基平均含量分析可知，11S球蛋白含量高于7S球蛋白含量；11S组分中各亚基含量Basic亚基＞Acid亚基＞A3亚基；7S组分中各亚基含量beta;亚基＞alpha;亚基＞alpha;prime;亚基＞gamma;亚基。 　　同时，表1中各个亚基的变异系数为alpha;prime;（0.32）、alpha;（0.38）、beta;（0.23）、gamma;（0.77）、总7S球蛋白（0.32）、A3（0.21）、Acidic亚基（0.23）、Basic亚基（0.31）、总11S球蛋白（0.24）和11S/7S（0.31）。其中变异系数最大的为gamma;亚基，