真核基因在大肠杆菌中的表达.pptxVIP

真核基因在大肠杆菌中的表达;基因与基因工程 基因操作的主要技术原理 基因克隆的酶学基础 基因克隆的载体 基因的分离与鉴定 基因的表达与调节;讲述的内容提纲;第一节 真核基因的大肠杆菌表达体系;1. 大肠杆菌表达体系;背景清楚，特别是对其基因工程表达调控的分子机理研究的比较深入。 安全，且有多种不同的菌株和质粒载体。 已有许多真核基因在大肠杆菌中实现高效表达。 培养方便、操作简单、成本低廉，因此易于进行批量生产;真核基因与原核基因的差别：编码基因的不连续性，含有内含子序列，大肠杆菌不具备对pre-RNA进行加工剪接的能力。 转录信号的不同：真核基因转录的mRNA不具备结合细菌核糖体所必须的SD序列；细菌的RNA聚合酶不能识别真核启动子。 真核基因mRNA 5’-端有帽子结构，3’-端有poly(A)尾巴，影响其稳定性及与细菌核糖体结合的能力，从而阻碍正常的转录和翻译。;解决方案;许多真核基因的蛋白质产物存在翻译后的修饰过程：磷酸化、糖基化等，大肠杆菌中无此过程，因此，表达的蛋白无法正确折叠，由此产生的三级结构通常是不可溶的，常形成包涵体，无活性。 表达的真核蛋白质被细菌的蛋白酶识别并降解。;2. 克隆基因正确表达的基本条件;另一个重要条件：编码的蛋白质产物应能维持正常的稳定性。 表达蛋白被大肠杆菌蛋白酶降解。 蛋白质三级结构形成的速率与其稳定性有关。 蛋白质三级结构的正确形成需要分