DNA的半保留复制教学文案.pptVIP

34???????? DNA的复制和修复 ;;DNA的复制 DNA的半保留复制 DNA复制的起点和方式 DNA聚合反应有关的酶 DNA的半不连续复制 DNA复制的过程 真核生物DNA的复制 DNA的损伤和修复 DNA的突变;中心法则;;;Watson 和Crick提出的DNA双螺旋复制模型;;实验1：1958年 Meselson 和 Stahl利用氮的同位素15N标记大肠杆菌DNA，首先证明了DNA的半保留复制。 E.coli，15NH4Cl为唯一氮源，培养12代，从而使所有E.coli DNA标记上15N。 15N-DNA 比 14N-DNA的密度大。 氯化铯密度梯度离心;?  亲代 F1 ? ?  ? ;?  F2 ? ? ?;DNA的半保留复制;实验2：1963年Cairns用放射自显影（autoradiograph）的方法第一次观察到完整的正在复制的大肠杆菌染色体DNA. 3H-dTTP标记大肠杆菌DNA，经过将近两代时间 溶菌酶消化细胞壁 放射自显影 ;? ?  ? ? ? ? ;DNA的半保留复制;34.1.1????? DNA复制的起点和方式 基因组能进行复制的单位称为复制子（replicon）。 每一个复制子都含有控制复制起始的起点（origin）,可能还有一个终止复制的终点（terminus）。 复制叉（replication fork） ;;DNA复制的起点和方式;DNA复制的起点和方式;DNA的不同复制方式;Rolling circle (φX174);DNA的不同复制方式;34.1.3 DNA聚合反应有关的酶 多种DNA聚合酶(polymerase)和DNA连接酶(ligase) ;34.1.3.1 DNA的聚合反应和聚合酶;DNA聚合酶催化的反应;链的延长;链的延长;DNA（RNA）的合成需要模板。 切口（nick） 缺口 (gap) DNA聚合酶的反应可以利用双链作为模板和引物，也可利用单链DNA作为模板和引物。 图34-12（自读） ;;34.1.3.2 大肠杆菌DNA聚合酶 DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。 ;DNA聚合酶Ⅰ a.通过核苷酸聚合反应，使DNA链沿5‘→3’方 向延伸(DNA聚合酶活性)； b.有3端水解DNA链（3→5核酸外切酶活性）； c.有5‘端水解DNA链的活性（5’ →3核酸外切酶的活性）； d.有3端使DNA链发生焦磷酸解； e.无机焦磷酸盐与脱氧核糖核苷酸磷酸之间的焦磷酸???换。 ;N---核酸外切酶(5 →3 ) 核酸外切酶(3 →5 ) 聚合酶----C ;*DNA聚合酶只允许底物与模板之间形成Watson-Crick类型的碱基配对. * 错配的碱基由DNA聚合酶的3 -5核酸外切酶活性切除单链DNA的3末端核酸。校对作用可使掺入核苷酸的错误率降低100倍以上. (double check) * DNA聚合酶Ⅰ速度太慢，持续合成能力低，许多基因突变都会影响DNA的复制，但都与它无关. ;DNA聚合酶Ⅱ有聚合酶活性，3 -5核酸外切酶活性，但无5 -3核酸外切酶活力 DNA聚合酶Ⅲ由多个亚基组成，是大肠杆菌内真正负责从新合成DNA的复制酶（replicase）. ;;DNA聚合酶Ⅲ的结构： ;DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ： 1999年发现 涉及DNA的错误倾向修复（errorprone repair）;34.1.1????? DNA连接酶 催化双链DNA切口处的5’-磷酸基和3’-羟基生成磷酸二酯键。 ;34.1.1????? DNA的半不连续复制 ? 1968年冈崎等发现，DNA复制时，首先合成出来的是较短的DNA片段，接着出现较大的分子，最初出现的是长约1000个核苷酸左右的DNA片段，称为冈崎片段（Okazaki fragment）。 ;??? DNA的半不连续复制;DNA聚合酶不能从头合成DNA 引物合成酶（primase）：引物是在DNA模板的一定部位合成并互补于DNA链，合成方向也是5→3,催化合成一段RNA,通常长几个到十个核苷酸。 ;???? DNA的半不连续复制;gyrase 旋转酶（topoisomerase Ⅱ） Helicase 解螺