薄层色谱的操作.pdf

薄层色谱的操作 1.方法原理 薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上 , 利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同 的力的作用。 (1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 (2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用， 氢键和范德华力的作用而产 生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同， 整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。 基于这点，TLC 系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。 用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来 评价。 2. 薄层板 2.1 手工自制板 2.1.1 玻璃板的要求 :用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄 1~2mm 的优质平板玻璃，普通窗玻 璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。玻璃板反复使用时，应注意经常 用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求 2.1.2 制作方法 :除另有规定外，将 1 份吸附剂加适量的水（如 1 份硅胶 G 一般加 3 份水），在研钵中用研杵沿一个方向 小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆 ,立即倾入涂布器中 , 均匀地向前推进涂布在玻璃板上 ;或按照不同涂布器的规定 操作涂布 ;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干 ,再在规定的温度 (一般为 105 ℃~110 ℃) 下烘约 30 分钟活化 ,贮于干燥 器中备用。薄层板的厚度一般为 0.25~0.5mm. 。 2.2 商品化供应的预制板和高效板 2.2.1 板的尺寸 20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm 图 1 不同的板尺寸 TLC/HPTLC 预制板有不同的规格供应。常用的尺寸为 20 x 20 ，10 x 20 ，20 x 10 ，或 10 x 10 cm 。使用的规格取决于 TLC 或 HPTLC 的类别和样品的数目。 2.2.3 TLC/HPTLC 板的预洗及活化 一般来说， 色谱板应用溶剂如氯仿 - 甲醇(8:2) ，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。 具体操作可通过空白色谱展开 来实现。 色谱板预洗完后 ,应在 105°C 加热 1 小时进行干燥，再在室温下置放至少 2 小时（需采取保护措施以防止实验室空气中 的污染物重新附着在其上面，如放置在空的干燥器中）。 3. 样品点样 3． 1 点状点样和条带状点样 每次点样前， TLC/HPTLC 板应在正常光线下和紫外灯下用肉眼检查薄层的损伤情况和杂质，只有无损伤、清洁的