第五章 细胞存活曲线.ppt

第五章细胞存活曲线;目;参考文献;第一节;电离辐射反应时间标度;证明细胞辐射靶在细胞核上; 电离辐射整体生物学效应是以辐射对细胞产生的效应（尤其是细胞死亡或存活）为基础的。 细胞放射生物学效应是放射生物学理论的基础，也是确定性（组织学）效应、肿瘤组织控制和急性辐射反应等发生的重要依据。 因此，辐射的细胞效应是医学放射生物学的核心内容。;细胞死亡还是存活？;细胞死亡还是存活？;细胞死亡还是存活？;有丝分裂细胞间期在？;不稳定型染色体畸变导致分裂期死亡;电离辐射导致细胞增殖型死亡证据;细胞凋亡与细胞坏死？;细胞凋亡的阶段性 P53启动 线粒体与bcl-2/Bax caspase系统 凋亡的不同分子事件 DNA梯子 质膜崩裂 其他;电离辐射引起细胞凋亡的启动途径;细胞凋亡的最终杀手是caspase3;.·基础·放射医学系;.·基础·放射医学系; 细胞凋亡的检测方法 ;细胞凋亡的形态学变化;4.2 细胞坏死(necrosis) ; 细胞坏死是一种病理性细胞死亡，电离辐射也可以引起 ; 凋亡还是坏死，细胞死亡的扳机有何不同？ ;4.3 自噬死亡（自吞噬，Autophagy ）;自噬（又称为II型程序性死亡）包括： 识别、隔离、融合、降解和再加工五个阶段 隔离成自噬小体，然后自噬小体与溶酶体融合在一起； 融合包括酸化、成熟和转运三个步骤； 降解由atg12-atg5与atg8两大泛素化结合系统负责； 再加工是为其他细胞提供崩解分子和能源物质ATP。 自噬基因缺陷型疾病种类包括： ;.·基础·放射医学系;4.4 衰老（senescence）;研究表明：启动Bcl-2、PI3K和NF-KB等细胞生存信号通路能使某些细胞远离死亡。;4.5 旁效应（bystander effect）;.·基础·放射医学系;第二节;1、失去增殖能的细胞死亡;Colony = 50 cells Small colonies?; 已知数目、充分分散的独立细胞群，接受电离辐射均匀照射后，一些细胞因凋亡、坏死或自噬等原因立即死亡，另一些细胞在经历几次传代由于分裂障碍而后出现的绝育性死亡。因此经一段时间培养，培养皿上会形成一定数目由残存细胞而来的克隆。 按不同辐射剂量对相应残存细胞而来的克隆数绘制“细胞存活曲线(Cell-survival curve) ”，该曲线可反映照射后细胞的存活规律。 ;数量已知 充分分散 独立生长; 一定的辐射剂量下所形成的独立细胞集落数与原接种细胞数之比，称为该剂量下细胞克隆存活分数（Survival Fraction, SF）。 横坐标用常规坐标，表辐射剂量（D，Gy） ；纵坐标用对数坐标，表细胞存活分数（SF，%），细胞存活曲线为SF对D作图。 SF计算时应先校正接种效率PE。; 但细胞培养时，由于传代消化液或传代机械性损伤等原因，即使未受照射细胞也不可能保证全部细胞都能形成集落。细胞未受照射时，形成的实际集落数与原接种细胞数之比，称为接种效率(Plating Efficiency, PE)。 计算各组细胞存活分数SF时，需用接种效率PE对各组细胞存活分数进行统一校正： 形成的集落数 SF = ─────────── 接种的细胞数×接种效率 ;低LET射线细胞存活曲线的典型特征： 极低剂量0-a区：第一次线性，单击多靶 稍高剂量a-b区：过度，非线性关系，弯曲 高的剂量b-c区：第二次线性，单击单靶 从现实到理论，还是从理论到现实？;3、常见细胞存活曲线仿真模型;4、建立数学模型，寻找放射生物学规律 （模型------一种从现实去接近理论的科学探索方法） 很难用一简单数学公式确切恰当地描述这种电离辐射的剂量-效应关系，只能是一定程度上近似理论模型； 目前，两种流行数学模型分别是多靶打击模型和线性平方模型，检验模型是否符合的方法是拟合优度的检验； 存活曲线仿真模拟的目的是提取实验资料背后规律性参数值、比较辐射规律、计算辐射敏感性； 更便于不同细胞放射生物学特性和作用机理的分析与判断。;5、细胞存活曲线制作的实验方法概述;Cell survival curve in vitro;Skin colonies;Bone marrow stem cells;第三节; 多靶打击模型(multi