基因编辑技术全版.pptVIP

构建与靶基因同源 (10～15kb)的载体 外显子插有新霉素抗性基因 （neor）作为正选择 疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因作为负选择 neor 和HSV-tk作双重筛选 存活的ES细胞 将重组体导入ES细胞，体外培养 显微注射 回交得到X被敲除的动物 表型分析 同源重组引起的基因敲除—ES细胞 技 术 路 线 演示课件 图 示 演示课件 演示课件 ZFN 技术原理 锌指核酸酶（Zinc-finger nucleases, ZFN）是人工改造的限制性核酸内切酶，利用不同的锌指结构识别特异DNA序列，利用核酸酶切断靶DNA。 锌指结构中每一个α螺旋可以特异识别3-4个碱基； 人工设计识别特异DNA序列的α螺旋采用如上的通用序列，通过改变其中7个X来实现识别不同的三联体碱基，TGEK是多个螺旋间的连接序列； 构建成对人工锌指结构域和FokI融合蛋白（ZFN）可以在指定区域切断DNA双链。 演示课件 ZFN 技术 锌指核酸酶介导的定向染色体删除 研究人员可以利用ZFN技术进行各种基因编辑，比如基因敲除。已建立有ZFN库，识别多种DNA序列，但还不能达到识别任意靶DNA的目的，其应用受到一定的限制。 演示课件 演示课件 崭新的技术 - TALEN 经典的挑战 – 染色体DNA序列的人工编辑修改 （点）突变：Silent；Missense； Nonsense；