2014分子肿瘤概论(研究生课件)学生总结.pptVIP

③胱氨酸蛋白酶类 Cathepsin B ④天（门）冬氨酸蛋白酶 cathepsin D, E 6.瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子 微小淋巴管、微小静脉壁 缝隙 血管 基底膜缺损 瘤细胞存在形式 单个 成团 同类癌栓 异类癌栓 黏附分子对其发挥调节作用 7.在特定器官的毛细血管滞留并黏着，再次穿过血管壁并定居、增殖 器官特异性（选择性）机制 (1) 黏附分子的作用 (2) 化学趋化因子（归巢现象) (3) 微环境不适合 (4) 与免疫状态有关 （二）机体免疫状态与肿瘤浸润转移 参与控制转移的免疫细胞主要有 NK 细胞 巨噬细胞 T 淋巴细胞 （三）肿瘤浸润转移相关基因 转移相关基因 指基因的表达和改变能够促进或导致肿瘤发生转移的基因 （四）肿瘤表观遗传改变与肿瘤浸润转移 表观遗传学(Epigenetics) ---与遗传学(genetic)相对应的概念 ---表型状态改变，基因型不改变 ---没有DNA序列变化的情况下， 可遗传的基因表达改变，导致的基因产物的变化。 ---1942年提出，上世纪80年代后期逐渐兴起的一门新学科 DNA的“后天性”修饰 CpG岛高甲基化 癌细胞基因组低甲基化 组蛋白残基的各种修饰 磷酸化 乙酰化 甲基化 （五）肿瘤干细胞(tumor stem cell, TSC) 2001年由Reya等提出 2006年美国癌症研究协会（AACR）定义 存在于肿瘤组织中具有无限自我更新能力并能产生不同分化程度的肿瘤细胞的细胞 特征 (1) 无限增殖和多向分化 (2)存在自我更新的信号传导途径 (3)具不同表型，异质性，对放化疗不敏感 (4)具有端粒酶活性 (5)能转移到各种不同的组织 （六）肿瘤微环境与肿瘤浸润转移 肿瘤细胞 间质细胞 细胞外基质 间质细胞所分泌的活性介质（细胞因子） 共同构成的局部内环境 微环境改变 肿瘤细胞 ----自分泌和旁分泌 全身和局部组织 -----代谢、分泌、免疫 结果： 限制或促进肿瘤的发生和发展 三.肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用 (一)蛋白表达异常的检测 ---免疫组化（荧光）定位 ---ELISA和Western blot 定量 抗原 抗体 标记 标记 抗原 标记 标记 抗原 标记 标记 抗原 标记 （二）基因拷贝数、转录产物mRNA异常 ---- 核酸分子生物学方法进行检测 核酸变性、复性基本性质 常用方法 1. 核酸分子杂交（nucleic acid molecular hybridisation）技术 最常用的基本技术 基本原理： --标记的已知碱基序列 （DNA或RNA单链片段） （探针probe ） （同位素　P32 I125 　 非同位素 生物素 地高辛 荧光素） --检测靶核酸（待测核酸）中是否存在与之 同源的序列 （1）原位杂交 （ISH） （2）荧光原位杂交 （FISH）， （3）双色（多色）银染原位杂交（DSISH） （4）Southern blot (DNA 杂交) （5）Northern blot (RNA 杂交) 2. 聚合酶链反应（polymerase chain reaction , PCR）技术 又称体外基因扩增 利用DNA变性和复性原理 体外进行 特定的DNA 片段高效扩增 获得或放大特异基因信号的重要手段 扩增产物的检测 凝胶电泳分析 琼脂糖凝胶电泳 (最常用) 聚丙烯酰胺凝胶电泳 单一条带 Real-time PCR 原位PCR RT-PCR 3.基因芯片技术 (三)基因突变的检测方法 1.聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products , PCR-SSCP） 长度相同，但碱基序列不同的单链DNA 构象不同 在非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳 迁移率（泳动率）不同 基本方法 作PCR 将产物变性而成为单链 进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 显示结果 可用同位素/荧光素标记 非同位素标记