高密度脂蛋白中胆固醇含量测定.pptVIP

高密度脂蛋白中胆固醇含量测定 * 一、实验目的与要求：通过测定高密度脂蛋白中胆固醇的含量，深入了解高密度脂蛋白在脂类代谢中的作用。 * 二、测定原理：在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，因此脂蛋白较难定量。由于其中的胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定高密度脂蛋白、低密度脂蛋白或或极低密度脂蛋白中的胆固醇，并分别称为高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或极低密度脂蛋白-胆固醇。 * 三、实验原理，高密度脂蛋白中胆固醇含量测定实验主要分为三个部分。首先，磷钨酸钠和氯化镁可沉淀血清中乳糜微粒、极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白，经离心除去。然后用胆固醇抽提液（乙酸乙酯和无水乙醇混合液）提取胆固醇。再用三氯化铁和浓硫酸与胆固醇作用生成紫红色化合物，与同样处理的胆固醇标准液进行比色测得其含量。 * 四、操作步骤：（一）在离心管C管中加入血清0.5毫升，磷钨酸钠0.25毫升，混匀后再加氯化镁0.25毫升，充分混匀，以每分钟4000转的速度离心10分钟，小心吸取上清液0.2毫升于标明He的离心管中，作为高密度脂蛋白抽提管He。（二）于另一标明Te（总胆固醇）的离心管中加血清及蒸馏水各0.1毫升。（三）在He离心管及Te离心管内各加抽提液1毫升，充分摇匀，以每分钟4000转的速度离心3分钟，取0.6毫升上清液加入H, T管用作胆固醇的测定。 * 按下表操作后，旋转摇匀各管内容物，放置10分钟后比色。用B管调零。分别读取各管在550纳米波长下的光密度值。 * 五、结果与计算 按照下列公式计算出高密度胆固醇和总胆固醇的含量并换算单位为毫摩尔每升。最后对照成年人的正常值比较实验结果。 * 六、注意事项：（一）加磷钨酸钠后需充分混匀，再加氯化镁，否则磷钨酸钠和氯化镁作用形成稳定的复合物，致镁离子浓度降低，使低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白沉淀不完全，造成结果偏高的误差。（二）加显色液后需充分混匀，再沿管壁加浓硫酸，使3管散热情况相似。 * 高密度脂蛋白中胆固醇含量测定 一、目的与要求 通过高密度脂蛋白（HDL）中胆固醇含量的测定，深入了解高密度脂蛋白在脂类代谢中的作用。 二、测定原理 在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，较难定量。由于其中的胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定HDL、LDL或VLDL中的胆固醇，并分别称为高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）或极低密度脂蛋白-胆固醇（VLDL-C）。 三、实验原理 磷钨酸－镁沉淀法：磷钨酸钠和氯化镁可沉淀血清中CM、VLDL及LDL，经离心除去。 胆固醇抽提：然后测定上清液中所含的HDL中胆固醇含量。用胆固醇抽提液（乙酸乙酯和无水乙醇混合液）提取胆固醇。 显色：再用三氯化铁和浓硫酸与胆固醇作用生成紫红色化合物，与同样处理的胆固醇标准液进行比色测得其含量。 四、操作步骤 （一）在离心管C管中加入血清0.5mL，磷钨酸钠0.25mL，混匀后再加氯化镁0.25mL，充分混匀，4000r/min离心10min，小心吸取上清液0.2mL于标明He的离心管中，作为HDL抽提管He。 （二）于另一标明Te（总胆固醇）的离心管中加血清及蒸馏水各0.1mL。 （三）在He离心管及Te离心管内各加抽提液1ml，充分摇匀，4000r/min离心3min，取0.6ml上清液加入H, T管用作胆固醇的测定。 高密度脂蛋白中胆固醇含量测定操作方法表 试剂（mL） 测定管（H） 测定管（T） 标准管（S） 空白管（B） HDL上清液 0．6 - - - 总胆固醇上清液 - 0．6 - - 抽提液 - - - 0．5 胆固醇标准液 - - 0．5 - 蒸馏水 - - 0．1 0．1 显色液 1．5 1．5 1．5 1．5 摇匀 浓硫酸 1．5 1．5 1．5 1．5 旋转摇匀各管内容物，放置10min后比色。用B管调零。 分别读取各管550 nm处的光密度。 五、结果与计算 HDL胆固醇（mg/dL）= 总胆固醇（mg/dL）= mmol/L=mg/dL×0.0259 ×标准胆固醇标准液浓度×稀释倍数 ×标准胆固醇标准液浓度×稀释倍数 正常值男：1.06～1.61mmol/L(41.1～62.3mg/dL)　　 正常值女：1.08～1.74mmol/L(41.7～67.3mg/dL) 高密度脂蛋白中胆固醇含量测定 * 一、实验目的与要求：通过测定高密度脂蛋白中胆固醇的含量，深入了解高密度脂蛋白在脂类代谢中的作用。 *