南京林业大学森林培育学实验.docVIP

实验四 种子生活力测定 一、实验目的和要求 了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。 测定方法： 由于各类种子的内含物不同，对试剂的反应也不相同，可分别选用不同的方法测定生活力。当前以四唑和靛蓝染色法为主，还有硒盐、碘化钾法。 本实验采用四唑染色法。 二、测定原理 四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，水溶液无色。 染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。 判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。 三、材料及器具 材料：刺槐 器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等 四、方法及步骤 1. 测定样品的提取 从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。3次重复。同时准备部分种子作为后备。 2. 种子预处理（浸种，同发芽测定） 3. 溶液配制 溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水； 溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水； 缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合; 1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。 4. 取种胚、染色处理 剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿； 记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后备种子中补取； 种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。 5. 结果鉴定 经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。 有生活力：种胚和胚乳完全着色； 无生活力：种胚和胚乳完全不着色； 根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。 6. 种子生活力计算 生活力的百分率根据3个重复组计算，不带小数，重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同，最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。 种子生活力测定记录表 树种 刺槐 样品号 1 样品情况 良 染色剂 四唑溶液 浓 度_ 1% _____ 测试地点___ 实验室 ___ 环境条件：温度 15 ℃ 湿度 50 ％ 五、试验报告内容 1.进行种子生活力测定和计算，填写种子生活力测定记录表。 2.说明采用四唑染色法评价种子生活力的原理和判断依据。 原理：有生活力的种子活细胞内有脱氢酶，可与氧化还原反应指示剂：四唑（无色）反应而显色，被还原成为红色、稳定的三苯基甲腊。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。 判断依据：判断种子有无生活力，主要看胚和胚乳不染色坏死组织的部位及面积大小，而不完全取决于染色的深浅。染色的深浅可以区别健壮程度。即染色愈深，种子生活力愈旺盛。