VEGF-C过度表达与临床I期非小细胞肺癌淋巴结转移.doc

[通讯作者] 王洲E-mail:wz620226@ VEGF-C过度表达与临床I期非小细胞肺癌淋巴结转移 的相关性 王耀鹏1，2，朱晓峰1，王洲1（250021济南，山东大学省立医院胸外科1，266003青岛，青岛大学医学院附属医院胸外科2） [摘要] 目的 探讨cI期NSCLC中VEGF-C过度表达、MLVD计数、淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组化S-P法检测67例cI期NSCLC患者癌组织、癌旁组织、20例正常肺组织中VEGF-C蛋白表达和计数D2-40标记的MLVD，结合临床病理淋巴结转移情况进行统计学分析。结果 在NSCLC癌组织中，VEGF-C过度表达(81%)，MLVD计数显著增高(23.4±6.9)，均较癌旁组织和正常肺组织有显著差异(P0.01)；淋巴结转移N2组的癌组织中VEGF-C表达(100.0%)、MLVD计数(28.5±3.3)明显高于淋巴结阴性组的癌组织（35.7%，10.6±2.2，P0.01）；另外淋巴结转移数量和程度与VEGF-C表达强度成正相关（rs0.62，P0.01）。结论 VEGF-C在cI期NSCLC癌组织中过度表达与淋巴结转移密切相关，提示VEGF-C过度表达的cI期肺癌患者应该强化手术区域淋巴结清扫和术后必要的化疗、放疗等辅助治疗。 [关键词] 非小细胞肺癌；VEGF-C；微淋巴管密度；淋巴结转移 [中图分类号] R734.2 [文献标识码] A 肺癌发病率逐年增高，其中非小细胞肺癌（NSCLC）是其主要类型，淋巴结转移是影响NSCLC的主要因素之一，临床常用的术前影像学检查方法—胸部CT，对于诊断淋巴结是否转移的敏感性较低。本研究采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（S-P法）检测67例临床I期（cI期）NSCLC患者癌组织、癌旁组织和20例正常肺组织中VEGF-C蛋白的表达，计数D2-40标记的微淋巴管密度（MLVD），分析和探讨其与淋巴结转移的关系，通过术前肿瘤组织活检免疫组化检验而提高淋巴结转移诊断的敏感性，指导手术中淋巴结清扫和手术后辅助治疗。 1 材料和方法 1.1 临床资料 选取我院胸外科2008年1月～2008年7月手术前没有施行放疗和化疗、术前临床分期（结合强化CT、PET-CT、纵隔镜检查、肿瘤穿刺活检等）为cI期、且施行了根治性肺叶切除、系统性淋巴结清扫的全部NSCLC患者标本资料67例的癌组织、癌旁正常肺组织（为距肿块边缘5cm以上的正常组织）和同期20例行肺大庖切除术患者正常肺组织作为对照，淋巴结清扫范围参考MD-ATSmap[1]肺癌区域淋巴结图谱。术中取新鲜标本组织直径约为0.5cm，行病理科常规固定石蜡包埋等处理。 1.2 试剂和设备 兔抗人多克隆抗体VEGF-C（原液1：50稀释）、鼠抗人单克隆抗体D2-40（原液1：50稀释）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3 标本处理和方法 每例标本作4um厚连续切片，取中间3张，1张行HE染色，1张行VEGF-C免疫组化染色，1张行D2-40染色。PBS取代一抗作为阳性对照。 1.4 结果判定 全部标本均由3位经验病理科医师独立单盲阅片，结果差距超过30%者，重新组织交换阅片，取其平均值。VEGF-C和D2-40的阳性免疫产物均是位于细胞质内的棕黄色颗粒（图1，图2），对于VEGF-C，基本不着色为0分，着淡黄色为1分，着色适中为2分，着色深黄为3分；着色细胞占总细胞数5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，50%为3分。将每张切片着色程度得分和着色细胞数得分相乘为最后得分。0～1分为阴性（—），2～3分为弱阳性（+），4～5分为阳性（++），6～9分为强阳性（+++）。对于D2-40，凡染成棕黄色颗粒状，管壁由单层内皮细胞构成，内没有红细胞的确认为淋巴管。在×40倍镜下选取3个不同染色密集区域，×200镜下视野内淋巴管总数作为MLVD计数。 图1.VEGF-C阳性表达（×200高倍镜） 图2.D2-40阳性表达（×200高倍镜） 1.5 统计学处理 在SPSS10.0软件上对数据行数据分析，不同组间表达强度比较采用秩和检验，多组计量资料组间比较采用单因素方差分析，两组计量组间比较采用t和t，检验。P0.05为具有统计学意义，P0.01为差异显著。 2 结果 2.1不同组织标本中VEGF-C表达和MLVD计数（x±s）的关系 数据显示（表1），各种组织中VEGF-C均可有表达，不同组织标本中VEGF-C表达强度有显著差异（Hc=96.4235，P0.01），癌组织中VEGF-C的表达最强，与癌旁组织和正常组织比较差别有显著性（q=13.3070，31.5417，P0.01）。各种组织中都可能找到D2-40染色的微淋巴管，但是MLVD计数不同组间比较差异具有显著性