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《生命科学导论》-细胞学基础 细胞生物学研究方法教 师: 曲鑫建 讲师联系方式: 子信箱: mailto:xinjinqu@163.comxinjinqu@163.com 生命与医药学院 2014.06.21 用于细胞生物学研究的技术一、细胞融合二、单克隆抗体制备三、基因敲除技术四、动物克隆技术 一、细胞融合1.定义 在自然或人工条件下，使二个或二个以上细胞合并形成一个细胞的过程。2. 促融方法 生物学方法：仙台病毒 化学方法：PEG(聚乙二醇) 物理方法：电脉冲打孔仪3. 应用A.细胞核和细胞质间的相互作用鸡红细胞 组织培养细胞 融合红细胞开始合成RNA,并进行DNA复制细胞周期相关因子的发现B. 膜蛋白流动性C. 基因定位二、单克隆抗体制备（monoclonal antibody） 单一的抗原 一个B淋巴细胞 特异性抗体 单克隆抗体定义: 从单个B淋巴细胞繁殖的细胞 克隆可以得到均质的抗体叫单克隆抗体。制备过程：1984年Nobel奖 B淋巴细胞＋“不死的”小鼠骨髓瘤细胞 杂交细胞（杂交瘤） B淋巴细胞(产生特异性抗体) 肿瘤细胞(在体外无限增殖)将每个杂交瘤细胞分别增殖，就得到很多单一细胞的克隆，一个克隆可以产生一种特异性单克隆抗体。三、基因敲除技术基因敲除是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代/view/5974162.htm靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。除/view/688262.htm同源重组外，新技术也逐渐被应用，成功的有基因的插入突变和miRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。例：基因敲除鼠Mario Capecchi (Late 1980s) (University of Utah)embryonic stem cells in inner cell mass as target cells1/104 cells undergo a process of homologous recombination. 四、动物克隆技术 1.“克隆”的定义：是指由一个细胞或个体以无性繁殖（asexual reproduction）或孤雌生殖而产生方式产生遗传物质完全相同的一群细胞或一群个体。克隆技术广义狭义胚胎细胞核移植细胞核移植胚胎分割体细胞核移植核移植技术：所谓核移植技术就是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。人类皮肤细胞核移植到家兔的卵母细胞里2. 动物克隆的应用（1）动物资源的种质保存包括地球上频危动物的挽救等。（2）生产移植器官，培育优良品种，与转基因技术相结合研制生物反应器生产基因药物。思考题1.克隆人是不是正常的人？怎样看待克隆人？2.身体上任何一部分的细胞是否都可以用来克隆？