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DNA连接酶 1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3’羟基和5’磷酸基团发生缩合反应，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD+依赖型。 常用的DNA连接酶： T4 DNA 连接酶 E.coli DNA 连接酶 Tsc DNA 连接酶 E.coli 、T4和Tsc DNA连接酶 催化连接底物 反应需辅因子 用途 连接温度 连接时间 E.Coli DNA 连接酶 DNA NAD 黏性末端的连接 4~15 过夜 T4DNA连接酶 DNA、RNA ATP 黏性末端 平末端的连接及切口的连接 4~15 过夜 TSC DNA 连接酶 DNA NAD 黏性末端 平末端的连接及切口的连接 45~65 较短 二、DNA片段的连接方法 由于待连接的DNA片段具不同形式的末端，因此须采用不同的连接方法。 （一）具互补黏性末端片段之间的连接 （二）具平末端DNA片段之间的连接 （三）DNA片段末端修饰后进行连接 （一）具互补黏性末端片段之间的连接 （二）具平末端DNA片段之间的连接 （三）DNA片段末端修饰后进行连接 1、DNA片段末端同聚物加尾后进行连接 2、黏性末端修饰成平末端后进行连接 3、DNA片段5’端脱磷酸化作用后连接 4、DNA片段加连杆或衔接头后连接 DNA片段末端同聚物加尾后进行连接 特点：给平末端DNA片段3’-OH加上同聚物。 黏性末端修饰成平末端后进行连接 特点：先修饰成平末端，后连接。 DNA片段5’端脱磷酸化作用后连接 特点：先使一种DNA片段的5’端由磷酸基（- P）转变为（-OH） DNA片段加连杆或衔接头后连接
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