水样中细菌菌落总数的测定原理及方法电子教案.docVIP

《水处理微生物》教案 知识点 细菌菌落总数测定 学时 9学时 教学内容 1.细菌总数是水质污染的重要指标； 2.稀释平板培养法； 3.检测各环节操作规范。 教学重点 无菌操作要求 教学难点 无菌操作的实施 各环节操作要求 参考资料 环境微生物　陈剑虹、胡肖容主编　科学出版社 环境微生物　周凤霞、白京生主编　化学工业出版社 一、训练目标 1．能准确地采样和稀释样品，会制备平板。 2．能正确报告样品中的活菌数。 二、材料用具 1.材料与试剂 待测样品，牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，75%酒精棉球，pH试纸等。 2.仪器与用具 天平，培养箱，干燥箱，超净工作台，水浴锅，称样瓶，吸管，培养皿，玻璃珠，试管，三角瓶，试管架，酒精灯，记号笔等。 三、训练操作规程 1、稀释平板菌落计数法操作流程及技术要点 操作流程 操作技术要点 训练准备 提前分组，建议2人一组，每组准备以下物品： 1．培养基：150mL牛肉膏蛋白胨培养基1瓶 2．无菌水： 9mL无菌水5～7支（吸取9mL蒸馏水装入试管中，所需数量根据样品中含菌量而定），然后塞上塞子 培养基、无菌水采取高压蒸汽灭菌，于121 3．1mL吸管8支，10mL吸管1支，培养皿9套。用报纸包扎好，在干燥箱中于160℃ 取样 超净工作台里操作，也可室内操作（需70%酒精净空，酒精灯无菌区操作）。 1．提前30min打开超净工作台风机和紫外线开关（注意：操作前关闭紫外灯） 2．在超净工作台上，按无菌操作法准确量取待测样品1mL，注入到第1支装有9mL无菌水试管中（注意：吸管吸液端不要接触到液面），振荡制成10-1菌悬液 系列稀释 再取1支吸管伸进10-1菌悬液吹吸数次，吸取1mL菌液注入到第2支装有9mL无菌水的试管中，混匀即成10-2菌液 依此法按10倍序列稀释至适宜稀释度（图6-3）（注意：每换一个稀释度取1支新吸管） 标记 取12套培养皿，在皿底注明稀释度，每个稀释度重复3皿（含无菌水3皿） 加样 取连续的3个稀释度菌液，用一支无菌吸管吸取1mL菌液加入对应的培养皿中 制平板 1．提前将牛肉膏蛋白胨培养基融化 2．待培养基冷却至50℃左右时倒入培养皿中（每皿约15mL 3．将培养皿在平面上轻轻摇动，使菌液与培养基混合均匀，放平待其凝固 培养 将培养皿倒置放入培养箱中，于28℃ 菌落计数 一般用肉眼观察计数，必要时可用放大镜检查，以防遗漏（注意：平板上的菌落应单独分散，若平板有较大片状菌苔生长，则不宜采用） 一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度，算出同一稀释度3次重复的菌落平均数，再根据公式求出样品的含菌量 菌数报告 1.若只有一个稀释度的平均菌落数在30～300，则该平均菌落数乘以稀释倍数即为该样品中的细菌总数 2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300，则视二者之比如何来决定。若其比值小于2，应报告其平均数；若其比值大于2，则报告其中较小的菌数 3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 6.若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用2位有效数字，在2位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示 2、稀释度选择及菌落数报告方式 例次 不同稀释度的菌落数 两稀释度菌落数之比 菌落总数 报告方式 10-5 10-6 10-7 1 1365 135 20 — 135 1.4×108 2 多不可计 295 46 1.6 377.5 3.8×108 3 多不可计 271 60 2.2 27100 3.7×108 4 多不可计 多不可计 313 — 313 3.1×109 5 27 11 5 — 27 2.7×106 6 多不可计 315 12 — 315 3.2×108 7 0 0 0 — 105 105 四、训练报告 报告所测定样品中的微生物活细胞数。 思考：测定样品中菌数时为什么要选择三个连续的稀释度？