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实验三 血清谷丙转氨酶（ALT) 活性的测定 一、实验目的： 进一步掌握分光光度法基本原理和应用 通过实验, 理解酶促反应的原理 掌握反应原理、操作步骤及标准曲线的绘制。 二、原 理 三、方法 分光光度法----标准曲线法 定 量 分 析 方 法 1. 对比法 将标准与样品分别在相同条件下显色，测定其吸光度。因是相同物质在相同条件下测定，故可按下式计算出样品的浓度： 2. 标准曲线法 (1) 配制一系列不同含量的待测组分的标准溶液，以不含待测组分的空白溶液为参比，测定标准溶液的吸光度。并绘制 吸光度—浓度曲线 (2) 得到标准曲线（工作曲线），然后再在相同条件下测定试样溶液的吸光度。由测得的吸光度在曲线上查得试样溶液中待测组分的浓度，最后计算得到试样中待测组分的含量。 几点注意： 理想的标准曲线应为：用不同浓度标准溶液所测得的吸光度对浓度作图时，是一条斜率接近于1通过原点的直线； 标准溶液浓度范围应在被测物质浓度的一半到二倍之间； 吸光度在0.05---1.0之间为宜。 四、操作步骤 五、注意事项 1.血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。 2.在血清中加入底物后，应准确记时。 六、实验的结果 1.第一组同学绘制标准曲线 2.其余组的同学做ALT活性的测定 实验报告要求2项都完成 七、讨论与小结 A标 A样 KC样L KC标L = 则： C样 = A标 A样 C标 0 浓度C 吸光度 A 0 浓度C 吸光度 A
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