理学分子水平下的小鼠性取向调控研究介绍.pptxVIP

主要内容：;;人体内，首先从血清中发现5－HT：; 人体内的5－HT： 5% 中枢神经系统,脑干中缝核群 是5－HT神经元集中的地方 95％ 胃肠道 90% 肠嗜铬细胞 10% 肠道各层的神经丛中;体内5-HT的合成;来源于噬菌体P1 的Cre /loxP 系统包含有2 个重要的组成:一个是loxP 位点,另一个是识别loxP 位点的Cre 重组酶。;称为loxP 的两个识别位点可以位于不同的DNA 分子上,也可以在同一个DNA 分子上;同一分子上既可以是同向的,也可以是反向的。 loxP 位点中的8bp 间隔区是位点中唯一不对称部位,这种非对称性决定了loxP 位点具有方向性,从而决定了重组的方向性。;loxP 位点的性质;第一种工作方式的应用：;Lmx1b基因对于小鼠大脑中血清素脑细胞的发育具有重大影响。在敲除了该基因的小鼠大脑中血清素脑细胞完全消失。 本实验使用ePet1-Cre删除floxed Lmx1b等位基因。 Floxed即前文所说的在靶基因两端插入loxP位点，是flanked by LoxP的缩写。 ePet1-Cre就是一种cre基因，从而在细胞中表达出相应的cre酶，删去the floxed gene。 本实验共用了四种基因型小鼠： 纯合子ePet1-Cre/Lmx1bflox/Lmx1bflox，即Lmx1b－/－ 同窝幼崽ePet1-Cre/Lmx1bflox/+，杂合子Lmx1b+/－ 野生型Lmx1bflox/Lmx1bflox without ePet1-Cre ，即Lmx1b+/+ 对照组ePet1-Cre without Lmx1bflox，即ePet1-Cre 值得注意的是，只有Lmx1b－/－不能发育出血清素脑细胞，从而中枢神经系统中没有5-HT。;我们首先检验了一只雄鼠对于一只被放进他的笼子中的C57雄鼠是如何反应的。;雄性小鼠有一种区别对待两性的行为方式，当他们遇到雌性小鼠或者信息素的时候能够发出一种30-110hz的超声波声音（以后简称之USVs），它的功能类似于爱曲以激发雌性的的感觉。;配偶选择实验;如果只面对雌鼠，他们的差别不大;接下来又进行了信息素实验和床铺实验，首先是信息素实验：;床铺实验;也许你会怀疑，失去了5-HT神经元的老鼠会不会变笨了？闻不出味道？分不出雄雌？以下是芝麻油实验、狐狸尿实验和社交实验：;社交记忆力实验和雌雄识别实验;之前的实验证明了5-HT神经元的作用，下一步我们要探究5-HT的作用。回忆之??讲的关于5-HT的合成步骤。Tph2作用于中枢神经细胞，Tph1作用于外周5-HT。;我们采用了Tph2－/－型的小鼠，左图表明大脑中5-HT含量大减。 之后的实验与前文所述的Lmx1b系列实验完全相同;雄雄;在只面对雌性时，都一样;面临抉择时，一种小鼠变了;Lmx1b －/－和 Tph2 －/－型的小鼠均是从胚胎期开始缺失5-HT的。为了研究成年期5-HT的影响，我们采用了两种手段：1、用pCBA除去小鼠体内的5-HT；2、试图改变Tph2 －/－的表现型。;pCBA组与盐水组 雄雄实验对比 以及床铺实验;现在是第二组实验，注射5-HTP。采用了基因型为Tph2+/+和Tph2－/－两种雄性小鼠。图中5-ＨＴＰ下的＋、－号表示注射５－ＨＴＰ或等量的生理盐水。可见Tph2－/－的各项指标均恢复到野生型水平。;雄雄交配实验，Ｔｐｈ２－／－注射之后四项指标均恢复至野生型水平;配偶选择实验和床铺实验，注射之后也均恢复至野生型水平;Tph2+/+和Tph2－/－只面对雌性的对比试验： 注射５－ＨＴＰ前后， Tph2－/－面对雌性无变化，都与无注射的野生型保持一致。而Tph2+/+注射后减少了雄－雌交配！而此时他的５－ＨＴ浓度增加！由此可以得到推论：高于正常野生型的５－ＨＴ浓度会抑制雄－雌交配，而处于正常野生型与Tph2－/－的浓度不影响雄－雌交配。 ;(1)the ratio of male–male and male–female interactions was repeatedly measured to analyse sexual preference; (2) Lmx1b-/- males showed increased USVs towards males but not towards females; (3)in mating choice, the latency, frequency an