实验二细菌基本形态及特殊形态观察.pdf

实验二 细菌基本形态及 特殊形态观察 一 目的要求 1 了解普通光学显微镜原理及构造。 2 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。★ 3 用油镜观察细菌基本形态。 4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢及观察有鞭毛细菌的运动。 二 基本原理 １　普通光学显微镜的结构 ２　普通光学显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色 4 芽孢染色 5 鞭毛染色及细菌运动 １　普通光学显微镜的结构 （1 )　机械系统　 　　包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等 （2 )　光学系统 　 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。 ２　普通光学显微镜的光学成象原理 （1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。 目镜 ： 目镜 物镜 低倍镜：10X 物镜 高被镜：40X 10 X 100X 油镜：100X ⑵　显微镜的分辨率 油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。 原因： ◆ 油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜 ◆ 油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜 ◆分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R ） R= λ∕2NA ( λ为入射光波波长；　　NA为显微镜数值孔径) NA= η.sin θ η为标本、物镜之间介质的折射率。 θ为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。 η = η = η =1.0 ， 低倍镜 高倍镜 空气 η η =1.52 油镜 香柏油 θ θ θ ， 低倍镜 高倍镜 油镜 sin θ sin θ sin θ 低倍镜 高倍镜 油镜 NA NA NA 低倍镜 高倍镜 油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。 汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。 3 荚膜染色 主要成分多为糖 类，无色透明且 菌体 不易着色常用负 染色观察。负染 荚膜 色是将细菌细胞 和背景着色，从 而把无色透明、 不着色的荚膜结 构衬托显现出来。 菌胶团： 多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。 菌胶团 4 芽孢染色 细菌芽孢壁厚而致密，透性 低，难于染色，但一旦被染 色又难于脱色。因此先用强 着色力的染料（孔雀绿）处 理，并同时加热，使菌体以 及芽孢均着色，后使菌体脱 色，而芽孢保留原色，经复 芽 菌 染（蕃红）