免疫沉淀类实验.pptVIP

实验一 双向免疫扩散试验 在琼脂凝胶中，待检人血清 IgG 和羊抗人 IgG 抗血清在不同孔内各自向四周扩散，在比 例恰当处形成肉眼可见的白色沉淀线，证明两 者发生特异性结合反应。 实验原理 ? 试剂 健康人血清，用生理盐水做 1:5~1:40 系列倍比稀释 、羊抗 人 IgG 抗血清、 10~15g/L 琼脂糖或琼脂粉 。 ? 仪器 水浴箱、温箱 。 ? 材料 载玻片、微量加样器、打孔器、 5ml 吸管、吸球、湿盒等 。 实验器材和材料 ? 制备琼脂凝胶：用生理盐水配置 10 ～ 15g/L 琼脂，隔水加热煮沸备用。 ? 浇板：将载玻片置于水平台上，用吸管吸取 4~4.5ml 融化的琼脂倾注于 玻片上，滴加时注意速度不要过快，要使琼脂盖满整张玻片，使其均 匀、饱满，勿溢出并避免产生气泡。 ? 打孔 ：待琼脂凝固后，将梅花形打孔模板置于琼脂板下，用直径 3mm 的打孔器打孔，使其孔径为 3mm ，孔距为 4mm ，孔要求圆整光滑，孔 缘不能破裂，底部勿与载玻片脱离。 ? 加样：用 10μl 微量加样器分别取抗原、抗体加入孔中。中心孔加入抗体， 周围孔分别加入不同稀释度的抗原。 ? 温育：将加好样的琼脂凝胶板平放于湿盒中， 3