植物组织硝酸盐含量测定与分析.pdf

植物组织硝酸盐含量的测定与分析 XXX,ZZZ,YYY 一 实验目的： 1、学会植物组织硝酸盐含量的测定方法。 2 、复习分光光度法，掌握分光光度计的使用。 3 、了解硝酸盐含量在植物营养生理中的作用。 4 、通过对实验原理的掌握，用分光光度法测定油菜柄的硝酸盐含量。 二、实验原理： （1）用蒸馏水将植物组织中的硝酸盐和亚硝酸盐提取出来。 （2 ）加锌粉将提取液中的硝酸根还原成亚硝酸根 ： （3 ）与对氨基苯磺酸生成重氮盐， 同α－萘胺结合生成玫瑰红色的偶氮染料： （4 ）在 520nm 有吸收峰，其颜色的深浅在一定浓度范围内与溶液中硝态氮含量成正比， 可 以用分光光度法进行测定 。， 三、实验材料： 油菜 Brassica napus L ． 四、实验试剂： （1）硝酸盐标准溶液：取恒重硝酸纳 0.6071g 溶于 1 升水中，配成 100 μg/ml硝态氮溶液储 存于冰箱中（ 0—5 ℃）备用。 （2）20% 醋酸溶液 (V/V) ： 取 2Oml 分析纯冰醋酸加 80ml 水。 （3）混合粉剂： 含硫酸钡： 100 α-萘胺： 2 锌粉： 2 对氨基苯磺酸： 4 硫酸锰： 10 柠檬酸 75 将上述各种试剂分别研细，硫酸钡烘干，再分别用等分的硫酸钡与其混合，然后再 把所有各剂混合在一起 , 使混合粉剂成为无颗粒状灰白色的均匀体， 配制粉剂应在干燥 洁净环境中进行，若空气湿度偏高，则混合粉剂成淡攻瑰红色。若药品不纯也会造成此 现象，降低测定灵敏度，配好的粉剂应保存在黑暗干燥条件下，七天以后即能使用，存 放条件良好，可存放数年，其测定稳定性比新配的更佳。 五、实验步骤： 1、标准曲线的绘制： （1）配标准系列：配制浓度为 0 、4、 8、 12、 16、20 μg/ml 的硝态氮溶液各 10ml 。 （2）显色：分别吸取 2ml 上述溶液转入到 50ml 比色管中，加 20% 醋酸溶液 18ml, 0.4g 混合粉剂，剧烈摇动 1 分钟，静置 10 分钟，用双层滤纸过滤。 （3）比色测定： 取上清液以蒸馏水作对照，测定其 520nm 的吸光度值，以浓度为横 坐标，标准样品的吸光度为纵坐标绘制标准曲线或作出回归曲线。 2 、植物组织中硝态氮的提取： 称取待测的植物功能叶柄 0.5g，剪成 l －2mm 的碎片， 置于干燥的三 角瓶中，加入蒸馏水 20ml ，加塞进行激烈振荡 1-3 分钟，放置 10 分钟。 上清液为硝酸盐提取液。 3 、植物硝态氮提取液的测定： （1）取上部清液 2ml ，显色 转入到 50ml 比色管中，加 20%醋酸溶液 18ml, 0.4g 混合粉 剂，剧烈摇动 1 分钟，静置 10 分钟，用双层滤纸过滤。 （2 ）比色测定： 蒸馏水作对照，测定显色后溶液 520nm 的吸光度值， 查标准曲线求出提 取液中硝态氮的浓度 ( μg/ml) 。 六、计算： 植物组织中硝态氮含量 ( μg/g)= C · V 其中： C 为标准曲线上查得的组织提取液含硝态氮浓度 ( μg/ml), V 为 lg 植物组织所制备的提取液总体积 (