《有机物的分离与提纯》课件97221.pptVIP

色层分析法总是由一种流动相，带着被分离的物质，流经固定相。从而使试样中的各组份分离。 按层析的机理分为：吸附层析、分配层析、离子交换层析和凝胶层析。 按分离的操作形式不同可分为：柱层析法、纸层析法和薄层层析法。 本节重点介绍纸层析法和薄层层析法。 (一)基本原理 纸上层析的操作是在一张滤纸(层析纸)上，一端点上欲分离的试液，然后把层析纸悬挂于层析筒内，如图4-2所示。使展开剂(流动相)从试液斑点一端，通过毛细管虹吸作用，慢慢沿着纸条流向另一端，从而使试样中的混合物得到分离。如果欲分离物质是有色的，在纸上可以看到各组份的色斑；如为无色物质，可用其它物理的或化学的方法使它们显出斑点来。 纸上层析是一种分配层析，以滤纸作为支持剂，滤纸纤维素吸附着的水分为固定相。试样经层析后，常用比移值Rf来表示各组份在层析谱中的位置。 (二)层析条件的选择 1．层析纸的选择和处理 (1)要求滤纸质地均匀。 (2)滤纸要纯净，；不含影响展开效果的杂质；也不应与所用显色剂起作用。 (3)滤纸对溶剂的渗透速度适宜 2，展开剂的选择 (1)溶剂系统与被分离物质之间不应起化学反应。 (2)物质在溶剂系统中的分配系数最好不受或少受温度变化的影响，并在两相中的分配能迅速达到平衡。这样易于得到圆形斑点。 (3)挥发性较好，使滤纸在展开后易于干燥。 (4)被分离物质在该溶剂系统中Rf值应在0.1～0.85之间。两个被分离物质的Rf值之差应大于0.05。 一般不使用单一有机溶剂作展开剂，多采用水饱和的一种或几种有机溶剂作展开剂。 纸层析条件的选择最终还必须通过实践来决定。 (三)操作方法 纸上层析法的过程，主要有五个步骤： 1．点样 将试样溶于乙醇、丙酮、氯仿等易挥发的溶剂中，配成一定浓度的试液。若为液体试样，一般可直接点样。 3．显色 展层后，取出层析纸，画好溶剂前缘标记。 有些物质可以在紫外光下观察荧光或紫外吸收斑点,则不必使用显色剂。 4．定性分析 在一定的操作条件下，每种物质都有一定的Rf值，测量Rf值与手册对照。 5．定量分析 (1)剪洗法： (2)标准系列法： (3)直接比色： 二、薄层层析法 又称薄板层析法，把吸附剂均匀地铺在一块玻璃板或塑料板上形成薄层，在此薄层上进行色层分离，故称为薄层层析。因为层析是在薄层吸附剂上进行，所以也称为吸附薄层层析法。 优点： (1)快速、展开时间短。 (2)分离能力强：斑点小而清晰。 (3)灵敏度高：能检出几微克至几十微克的物质，比纸层析灵敏10～100倍。 (4)显色方便，能直接喷洒腐蚀性的显色剂，如浓硫酸等。可以高温灼烧。 (5)应用面广：可用于微量成分的分析，也可作制备层析。 (二)层析条件的选择 吸附剂和展开剂的选择是薄层层析分离能否获得成功的关键。必须根据欲分离物质的性质适当的选择使用。 1．吸附剂的选择 吸附剂一般应为粒度均匀的细小颗粒；具有较大的表面积和一定的吸附能力，与被分离物和展开剂不起化学反应，也不溶于展开剂中。 2．常用的吸附剂 (1)氧化铝： (2)硅胶： 另外，还有硅藻土(硅藻土G、硅藻土GF254)、聚酰胺、纤维素等。 3．展开剂的选择 薄层层析所用展开剂主要是低沸点的有机溶剂，一般使用2～3种组分的多元溶剂系统。 在选择展开剂时，应根据展开剂的极性、被测物的极性及吸附剂的活性三个方面来考虑。?三角图形法可作为一个初步估计的方法。 见图4-7。 通过试验选择展开剂，常用下面两种方法： (1)微量圆环法（见图4-8）； (2)载玻片法。 (三)操作方法 薄层层析法的过程，主要有六个步骤： 1、制薄层板 (1)软板的制备： (2)硬板的制备： 涂板方法:倾注法；刮层法；涂铺器铺层法。 （3）活化：涂好的薄层板要进行活化。。 表4-6 湿法制板方法及活化条件 2．点样 将试样用适当的溶剂(—般用乙醇、丙酮、氯仿等，不宜用水)溶解，制成0.5～1％的试液。 点样量要根据薄层厚度、试样和吸附剂性质、显色剂的灵敏度以及定量测定的方法等，通过试验来确定。 3．展开 和纸层析相似，薄层层析在密闭的层析缸中，用上行法、下行法或近水平法展开。 4．显色 常用的显色方法有三类，在紫外光下观察、以蒸气熏蒸显色、以及喷以各种显色剂。 5．定性分析 显色后可以根据各个斑点在薄层上的位置计算出Rf值，然后与文献记载的Rf值比较以鉴定物质。但是薄层层析Rf值的影响因素很多，重现性较差，文献上查到的Rf值只能供参考。 6．定量分析 （1）目视比较半定量法： （2）洗脱法 薄层层析的定量测定 展开后，薄层分离所得斑点中化合物可进一步定量 ，其测定方法可分为两大类： 一类为洗脱测定法，将所需测定的斑点中的组分用适当溶剂洗脱，再选用适当方法定量； 另一类