凝血因子VII活性与多态性关系的研究.doc

???? 凝血因子VII活性与多态性关系的研究 ???? ???? 摘　要：目的　探讨凝血因子VII（FVII）活性与其多态性的关系。方法　运用PCR-DGGE筛查120例冠心病(CHD)和心肌梗死(MI)患者和123例健康人作对照者的FVII基因，以一期法检测研究对象FVII活性，分析比较患者与对照者的FVII活性及其遗传因素之间关系。结果　发现FVII基因3种多态性：5′端-400处G→A，5′端-323处10 bp插入/缺失多态性，8号外显子Arg353Gln（等位基因M1/M2）。Arg353Gln多态性与FVII活性显著相关（P0.05），等位基因M2与低FVII活性有关。结论　Arg353Gln多态性是影响FVII活性的重要标志。关键词：冠心病；　凝血因子VII；　多态性 Analysis of the relationship between FVII activity and the polymorphism TAO Rong　YU Jinde　LU Lin, et al.（Department of Cardiology, Rui Jin Hospital, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China） Abstract：Objective　To investigate the relationship between coagulation factor VII( FVII) activity and polymorphism. Methods　Denaturing gradient gel electrophoresis technique was used to study FVII gene variation and plasma FVII activity was measured by a one-stage assay in 120 cases with CHD and 123 normal controls. Result　A novel G→A polymorphism was found in the promoter region at position-400 bp from the start of translation. An insertion/deletion polymorphism of 10 bp in the promoter region (-323) and Arg353Gln polymorphism in exon 8 were also found. The latter was found to be associated with FVII activity. Conclusion　Arg353Gln polymorphism reduces FVII activity and may be an important marker in effecting FVII activity level.Key words：Coronary heart disease;　Factor VII;　Polymorphism 　　凝血因子VII(FVII)是凝血过程中的一个重要辅助因子［1］，是参与因子X外源性激活途径中唯一的凝血因子。FVII是一种维生素K依赖性血浆糖蛋白，由肝脏实质细胞分泌，活化前以单一多肽链形式存在。FVII被活化后，其促凝活性明显增加。晚近，国外研究报道血浆FVII活性（FVIIc）增高是冠心病(CHD)发生的危险因素［2,3］，并且发现两种FVII基因多态性与FVIIc存在相关性［4-11］：①位于FVII启动子区域-323 bp处的10 bp插入/缺失多态性［12］；②位于FVII 8号外显子353位氨基酸Arg→Gln多态性［4］。本研究将首次在中国人群中探讨血浆FVIIc、CHD和心肌梗死(MI)发生与FVII基因多态性的关系。 对象与方法 　　1. 对象：CHD 120例，平均年龄(62.5±10.4)岁，其中男性99例，女性21例。根据1979年WHO颁布的缺血性心脏病诊断标准，诊断为稳定性心绞痛46例，陈旧性心肌梗死74例，均经冠状动脉造影证实。正常对照组123例，平均年龄(45.8±10.4)岁，其中男性83例，女性40例，来自健康体检者，经病史、体检、心电等检查无冠心病表现。所有口服或静脉使用抗凝药物者均排除在本研究之外。　　2. 血浆FVII活性测定：采5 ml静脉血，分离血浆，按一期法测定［13］。　　3. 人基因组DNA抽提：进行酚-氯仿抽提外周血白细胞DNA，溶于TE中。　　4. PCR：应用Bio-Rad公司软件Macmelt