生物技术在食品致病微生物检测中的应用.pptxVIP

食品中致病微生物的检测技术;1.聚合酶链反应（PCR） ;李秀娟等（2009年）对117 株金黄色葡萄球菌的nuc片段进行了PCR 扩增和焦磷酸测序，结果显示所建立的PCR 方法能对117 株金葡菌进行准确检测，焦磷酸测序结果的一致性进一步验证了PCR 扩增结果的特异性，说明该方法针对目前所用的研究菌株而言，尚未出现假阳性和假阴性结果，具有较高的特异性。 ;传统PCR技术在实际应用中表现出一些缺陷，例如只能定性而不能定量地检测，且在有死细菌存在的情况下容易产生假阳性、不能检测致毒微生物产生的毒素???。 随着各项新技术的出现以及与PCR技术的有机结合，发展起来了一系列改进的PCR技术。 目前应用的方法主要有实时荧光定量PCR、多重PCR以及PCR联合技术等。;实时荧光定量PCR;杨柳等（2011年）根据沙门氏菌fimY 基因序列设计引物和探针, 采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品，成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR 方法，具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性。;多重PCR;PCR联合技术;刘成志等（2009年）根据志贺氏菌ipaH 基因的保守序列设计特异性引物，筛选合适的DNA 模板制备方法，采用快速常规PCR 和定量实时PCR 结合，对培养液中及乳饮料阳性样品中的志贺氏菌进行检测，建立乳饮料中快速检测志贺氏菌的有效方法。 杨大伟等（2011年）应用PCR 结合变性高效液相色谱( DHPLC) 技术，以A 型肉毒梭菌的A 型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物，PCR 扩增的产物经DHPLC 技术进行快速检测，最低检出限可达到为111ng /tube，该方法可以快速、准确检测A 型肉毒梭菌。 ;2. 核酸探针技术;微生物经过处理后固定于另一固相表面上, 经洗涤变性后加入DNA探针进行杂交，DNA探针可以与同源性的靶DNA进行互补性结合，依据指示剂选用合适的方法进行检测。目前，DNA探针技术已经在沙门氏菌、产肠毒素大肠杆菌及乙型肝炎病毒等检测中得到了应用。?? ;续文彬(2008年)针对单增李斯特氏菌hly部分基因设计探针，对肠炎沙门氏菌，大肠埃希氏菌，绿脓假单抱病菌，空肠/结肠弯曲杆菌等非单增李斯特氏菌经杂交保护分析后，只有单增李斯特氏菌为阳性结果，具有较好的特异性。 薛力刚等（2010年）通过吖啶酯标记核酸探针的方法检测病原菌，核酸探针与待检样品中金黄色葡萄球菌的rRNA 序列进行杂交，形成稳定的DNA: RNA 杂交体，使用碱液破坏未杂交探针，在碱性过氧化氢中检测发光。核酸探针法检测金黄色葡萄球菌大大缩短了检测周期，且特异性和敏感性较高，为金黄色葡萄球菌的鉴定提供了一种新方法。;3.基因芯片技术; 陈昱等(2009年)利用芯片技术对志贺氏菌等26株食源性微生物进行检测，最后成功建立了检测和鉴定志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的方法，为3种食源性致病菌的快速检测和鉴定提供了准确、快速、灵敏的方法。 贺晨等（2011年）筛选志贺氏菌、肠炎沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌O157等11种特异基因作为目的基因，建立了一种运用多重PCR 方法结合基因芯片技术快速、准确检测11 种常见致病菌的方法，为流行病学调查和传染性疾病的早期诊断和判定提供了一种有效的检测手段。; 陆长勇（2009年）针对金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、单核细胞增生李斯特菌等8种常见的食源性致病菌建立了基于单碱基延伸标签反应原理的基因芯片检测方法，其灵敏度可达到0.1pg，以鼠伤寒沙门氏菌为单一检测对象的细菌纯培养物灵敏度可达到5×102 CFU/mL。;结语;参考文献;[6]杨大伟, 刘云国, 谭乐义. 食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法的建立[J]. 食品工业科技, 2011(6): 398-400. [7] 续文彬. 单增李斯特氏菌液相核酸探针检测方法的建立与初步应用. 吉林农业大学硕士学位论文, 2008, 28-31. [8] 薛力刚, 刘金华, 王全凯. 金黄葡萄球菌核酸探针检测方法的建立[J]. 中国生物制品学杂志. 2010 , 23(1): 91-94. [9] 陈昱, 潘迎捷, 赵勇等. 基因芯片技术检测3种食源性致病微生物方法的建立[J]. 微生物学通报, 2009, 36(2): 285-291. [10] 贺晨, 孙鸿燕, 邵丽筠等. 多重PCR 结合基因芯片技术检测11种致病菌方法的建立. 中国实验诊断学, 2011, 15(4): 587-591. [11] 陆长勇, 施春雷, 张春秀等. 基于单碱基延伸标签反应的常见食源性致病菌基因芯片检测方法的建立[J]. 生物工程学报, 2009, 25(4): 554-559.; 谢谢观赏