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人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的克隆、表达与纯化
摘要 4-5
Abstract 5
缩略词 6-10
一 绪言 10-22
1 氨酰-tRNA合成酶的研究 10-16
1.1 氨酰-tRNA合成酶的结构 10-11
1.2 氨酰-tRNA合成酶的功能 11-14
1.3 氨酰-tRNA合成酶的起源 14-15
1.4 氨酰-tRNA合成酶的克隆、表达与纯化研究 15-16
2 色氨酰-tRNA合成酶的研究 16-18
2.1 原核色氨酰-tRNA合成酶的研究 16-17
2.2 真核色氨酰-tRNA合成酶的研究 17
2.3 线粒体氨酰-tRNA合成酶的研究 17-18
3 研究的背景、目的意义、研究内容和技术路线 18-22
3.1 研究的背景 18-20
3.2 本研究的项目依托与研究的意义 20-21
3.3 主要研究内容 21
3.4 主要技术路线 21-22
二 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达载体的构建 22-31
1 材料与方法 22-28
1.1 药品与试剂 22-23
1.1.1 材料与试剂 22
1.1.2 主要实验仪器 22
1.1.3 常用试剂配制 22-23
1.2 实验方法 23-28
1.2.1 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的基因片断的制备 23-25
1.2.2 pMD18-hmtTrpRS克隆载体的构建与鉴定 25-26
1.2.3 pET-24a(+)-hmtTrpRS表达载体的构建与鉴定 26-28
2 结果与分析 28-30
2.1 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的基因的获得 28-30
2.1.1 人的乳腺癌细胞(MDA-MB-435S)总RNA的提取 28
2.1.2 RT-PCR扩增人线粒体色氨酰-tRNA合成酶片段 28
2.1.3 pMD18-hmtTrpRS克隆载体的构建与鉴定 28
2.1.4 pET-24a(+)-hmtTrpRS表达载体的构建与鉴定 28-30
3 讨论 30-31
3.1 采取亚克隆的策略构建融合表达载体pET-24a(+)-hmtTrpRS 30
3.2 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的原核表达系统 30-31
三 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的表达与纯化 31-42
1 材料与方法 31-35
1.1 药品与试剂 31-32
1.1.1 材料与试剂 31
1.1.2 主要实验仪器 31
1.1.3 常用试剂配制 31-32
1.2 实验方法 32-35
1.2.1 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的表达 32-33
1.2.2 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的纯化 33-35
2 结果与分析 35-40
2.1 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的表达 35-37
2.1.1 IPTG浓度对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 35-36
2.1.2 诱导时间对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 36
2.1.3 诱导温度对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 36-37
2.1.4 培养基对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 37
2.2 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的纯化鉴定 37-40
2.2.1 包涵体的纯化 38-39
2.2.2 可溶蛋白的纯化 39-40
3 讨论 40-42
3.1 诱导条件对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶表达的影响 40
3.2 包涵体的形成 40-41
3.3 金属螯合亲和层析对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的纯化 41-42
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