accq·tag氨基酸分析方法(普通c18柱).doc

AccQ·Tag 氨基酸分析方法 氨基酸分析的特点 ? 多数氨基酸没有“显色基团” ?无法用简单的方法检测 ? 所有的氨基酸极性都很大,无法反相分离 + H COO RCH (N ) 3 ? ? 需要进行处理：“衍生” ?增加显色基团，提高检测灵敏度 ?改变样品的极性，改变分离模式 氨基酸样品衍生的目的 ? 提高检测的灵敏度 ?增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度 ?增加荧光基团以便使用高灵敏度荧光检测器 ? 改变分离的选择性 ?改变组份的基团，如： ? 变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离 什么是AccQ·Tag 方法？ ? AccQ·Tag方法是一种用于肽及蛋白质水解氨基 酸分析的柱前衍生技术 ? AccQ·Tag方法的内容包括: ?用Waters的AccQ·Fluor?衍生试剂(AQC)衍 生氨基酸 ?用反相HPLC分离衍生产物 ?用荧光或紫外检测器定量检测衍生产物 AccQ·Tag 方法的基础 ? AccQ·Tag方法的基础在于专为氨基酸分析而开 发的衍生试剂-AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀 酰亚氨基氨基甲酸酯) ? AQC是含N-羟基琥珀酰亚氨基的活性杂环氨基 甲酸酯,它是一种新型氨基衍生化试剂,结构如 下: O H N O N N O O AQC衍生试剂 AccQ·Tag 方法对仪器的要求 ? 一套Waters HPLC 梯度系统: ?2690(含脱气装置和柱温箱)-2487和/或474检测器 _M32色谱管理系统 ?600_在线脱气机_柱温箱_717(或7725i)_2487和/或 474_M32色谱管理系统 ?515×2_PCM_Mixer_柱温箱_TCM_717(或7725i)_2487 和/或474_M32色谱管理系统 ? 若非Waters的HPLC系统,则由于泵精度和仪器 系统体积等原因,可能得不到满意的分析结果 AccQ·Tag 方法所需的辅助设备 ? 衍生用: ?涡旋搅拌器 ?微量移液器(1-100μl) ?烘箱(可恒温至55℃) ? 配制流动相用: ?超声波清洗器 ?pH计(精确到0.01) ?溶剂过滤装置 ?100ml和1000ml量筒 ?500ml或1000ml烧杯 ?纯水器(可制备18MΩ无有机污染物之高纯水) AccQ·Tag 方法必需化学品 ? 一套Waters AccQ·Tag 化学组件包,包括: ?Waters AccQ·Fluor 试剂盒- 含有下述三种试剂各5瓶∶ ? Waters AccQ·Fluor 硼酸缓冲液(Buffer 1) ? Waters AccQ·Fluor 衍生剂粉末(2A) ? Waters AccQ·Fluor 衍生剂稀释液(2B) ?Waters AccQ·Tag 氨基酸分析柱 ?AccQ·Tag Eluent A浓液—一种预混合好的浓缓冲液 ?Waters氨基酸水解标样—10×1ml安瓿瓶装水解氨基酸标样.每 一瓶含17种水解氨基酸各2.5mM(胱氨酸为1.25mM) ? 6×50mm样品管—用于衍生样品和标样 ?Waters AccQ·Tag 化学组件包使用手册—详细介绍 AccQ·Tag 氨基酸分析方法的操作及问题解答 关于 AccQ·Fluor 试剂盒 ? 超纯试剂级的质量控制: ? AccQ·Fluor试剂盒中的三种试剂均经严格质量控制:原料的质 量控制,超净车间的生产环境,反复重结晶的工艺及产品的质量 测试,确保衍生空白的背景氨基酸干扰降至最低(＜2pmol) ? Waters AccQ·Fluor 硼酸缓冲液(Buffer 1) 控制三种主要污染物的含量:亚胺二乙酸＜13ppb,甘氨酸＜ 8ppb,丙氨酸＜9ppb ? Waters AccQ·Fluor 衍生剂粉末(2A) 在氩气净化的隔离罩内合成,经昂贵的重结晶,确保氨基酸背景 降至最低 ? Waters AccQ·Fluor 衍生剂稀释液(2B) 用低含水量(＜0.003%)的HPLC级乙腈,经去除甲醇处理(＜ 50ppb) AccQ·Tag 方法所需化学品 ?AccQ·Fluor 试剂盒需要从Waters订购 ?AccQ·Tag化学组件包中部分可代用的化学品: ? AccQ·Tag 氨基酸分析柱: ?基质与Nova Pak C18柱相同,必要时可考虑用其代用,但需筛 选,并非每根都能用 ?AccQ·Tag Eluent A 液 ?配方为140mM乙酸钠+17mM三乙胺+1mg/mlEDTA二钠盐,用 1:1H3PO4调至pH=4.95(用于紫外检测)或5.05(用于荧光检测)+0.5% NaN3(防止长菌) ? 若每天配制,当日用完,可不加NaN 3 ? A液中所需各种化学品纯度级别最好是优级纯 ? 配制用水需高纯水,或用KMnO 4重蒸之蒸馏水 AccQ·Tag