水产品中孔雀石绿残留量的测定-杨洪生.pptVIP

水产品中孔雀石绿残留量的测定 杨洪生 江苏省水产质量检测中心 农业部渔业产品质量监督检验测试中心（南京） 目 录 1. 简 介 孔雀石绿 中文名称：孔雀石绿、碱性绿、严基块绿、孔雀绿 英文名称：malachite green , MG CAS No. ：2437-29-8(oxalate salt) ；569-64-2(chloride salt) 分 子 量 ：929.0 (oxalate salt)；364.9 (chloride salt) 金属光泽的绿色结晶 易溶于水，溶液呈蓝绿色；溶于甲醇、乙醇和戊醇 见光易分解 无色孔雀石绿 英文名称： leucomalachite green, LMG CAS No. ： 129-73-7 分 子 量 ： 330.5] 不溶于水，但易溶于乙腈、二氯甲烷等 LMG比MG更加稳定； 在体内残留的主要形态 孔雀石绿的危害 研究发现MG与LMG均能使大鼠肝细胞空泡化，无色孔雀石绿还能使甲状腺滤泡上皮大量凋亡，减少公鼠甲状腺激素的释放； 能抑制血浆胆碱脂酶的作用，进而有可能造成乙酰胆碱的蓄积而出现神经症状。 此外，它还能通过溶解足够的锌，引起水生动物急性锌中毒，并引起鱼类消化道、鳃和皮肤轻度发炎，从而影响鱼类的正常摄食和生长，能阻碍肠道酶（如胰蛋白酶、a-淀粉酶）的活性，影响动物的消化吸收功能。 目前禁用孔雀石绿的主要国家和地区 加拿大于1992年禁止其作为渔场杀菌剂 美国规定在食用水产品中禁止检出 欧盟于2002年6月颁布法令禁止在渔场中使用 日本禁止在水产品中检出孔雀石绿 2005年，英国一家知名的超市连锁店出售的有机鲑鱼体内被发现含孔雀石绿，随即在全球引发“围剿”孔雀石绿的活动。 同年8月，韩国在福建、江西和安徽等地的出口鳗鱼产品中检出含有孔雀石绿。 数日后在香港市场出售的多种淡水鱼中检出含有孔雀石绿。 对我国的水产品出口贸易造成了不可挽回的经济损失。 中国孔雀石绿监控历程 《2000年度中华人民共和国出口动物及动物源性食品中有毒有害物质残留监控计划》 首次将出口鳗鱼中孔雀石绿残留量的监控列入年度计划 《无公害食品??水产品中渔药残留限量》（NY 5070-2001） 孔雀石绿规定为“不得检出” 《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》农业部农牧发[2002]1号 孔雀石绿为禁用药物 《2004年度中华人民共和国出口动物及动物源性食品有毒有害物质监控计划》 将养殖虾和鳗鱼中孔雀石绿的限量要求规定为“不得检出” 孔雀石绿常用检测方法 孔雀石绿屡禁不止的原因 价廉易得 对水霉病等疗效好，缺少替代药 缺乏有力的监管 养殖者对孔雀石绿副作用了解不深 　　 2.样品前处理 《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》 （GB/T 19857-2005) 仪器与设备 1100液相色谱仪（DAD二极管阵列检测器）（美国Agilent公司）； 酸性氧化铝柱，1g/3mL（美国Supelco公司）； 固相萃取装置（美国Supelco公司）； XW-80A微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）； AllegraTM 21R台式高速冷冻离心机（美国Beckman公司）； R-205Avanec旋转蒸发仪（德国Buchi公司）； 0.22μm滤膜（江苏汉邦科技有限公司）。 药品与试剂 乙腈、二氯甲烷、冰乙酸 （色谱纯，Tedia公司）； 孔雀石绿标准品、隐色孔雀石绿标准品（美国Sigma公司）； 无水乙酸钠（南京化学试剂一厂）； 对甲苯磺酸（上海凌峰化学试剂有限公司）； 盐酸羟胺（南京化学试剂有限公司）； 二甘醇（Fluka公司）； 酸性氧化铝，100-200目（国药集团化学试剂有限公司）； Millipore 超纯水。 样品准备 实验中所采用的样品为鱼样，去鳞、去皮，沿背脊取肌肉，用高速万能试样粉碎机打成匀浆，冷冻保存，用前解冻。 样品称取 称取5.00 g样品于50 mL离心管内 提取 加入： 1.5 mL 20%的盐酸羟胺溶液 2.5 mL 1.0 mol/L的对-甲苯磺酸溶液 5.0 mL pH4.5 乙酸盐缓冲溶液， 涡旋混合3min； 加入10 mL乙腈剧烈混合3min。 加入5g酸性氧化铝 再次混合3min 10 000 r/min离心15 min 上清液转移至100 mL离心管中 预先装有10 mL 水和2 mL 二甘醇 在50 mL离心管中加入10 mL乙腈，重复上述操作，合并乙腈层。 在100 mL离心管中加入 15 mL 二氯甲烷 混合2min 4 000 r/min离心10 min， 将二氯甲烷层转移至100 mL的棕色圆底烧瓶中