核酸实验室污染及应对策略2.docVIP

核酸实验室污染原因分析及污染控制对策 深圳市血液中心检验科 曾劲峰 SZBC 行政主管部门颁布文件 《临床基因扩增实验室管理暂行办法》 《医疗机构临床扩增实验室管理办法》 《血站核酸检测实验室质量保证指南》 ?血站核酸检测(NAT)实验室是具有特殊安全要求的工作场所 ?极微量的污染即可导致假阳性结果 ?保障血液安全（输血安全） ?保护献血资源（献血安全） SZBC 为何要高度重视核酸实验室环境 污染并制订应对策略 目前核酸检测（NAT）已经在输血安全血液筛查方面发挥着越来越大的 作用。但是由于其敏感性极高,微量的污染将造成实验失败. 核 酸 检 测 技 术 全国40余家 检测数量300万人份 核 酸 检 测 技 术 （nucleic acid amplification testing, NAT）包括两种扩增方式： 1.聚合酶链锁反应法（Polymerase chain reaction，PCR) 2.转录介导的扩增方法(transcription mediated amplification,TMA) PCR TMA SZBC 目 录 1 影响NAT实验室污染原因 2 实验室污染的判断和预防 3 核酸实验室污染的消除 4 核酸实验室污染的监控及对策 SZBC 一 影响NAT实验室污染原因 核 酸 标 本 污 染 标本阳性率异常增高 试 剂 污 染 产 物 污 染 实 验 阴性对照出现阳性 设备污染 室 其 他 污 染 SZBC 一 核酸实验室污染原因 标本污染 试剂污染 标本容器被污染 标本放置时, 由于密封不严溢于容 器外 试剂处理配制过程中 移液器 容器 标本核酸模板在提取过程中，由于 实验用水 操作导致标本间污染 或储存不当 在进行标本处理时，病毒可随气溶 胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此 间的污染 SZBC 一 核酸实验室污染原因 产物污染 其他污染 实验室中克隆质粒的污染 产物污染-最主要最常见 分子生物学实验室及用克隆质粒做 极微量的扩增产物污染, 就可形成 假阳性。 阳性对照的检验室，这个问题也比 较常见 克隆质粒在单位容积内含量浓度高 其污染可能性也很大 （产物来源可能来源于设备内部， 或实验室外部实验活动产生的污 染）。 SZBC 二 核酸实验室污染的判断和预防 实验室污染的表现形式 阳性标本数量异常增高 v 渐进式 (假阳性日益增多） v 散发式（假阳性样品不定期增多） v 突发式 (假阳性样品突然增多) 阴性对照出现阳性反应 SZBC 二 核酸实验室污染的判断和预防 定期统计实验室阳性数量 SZBC 二 核酸实验室污染的判断和预防 可能存在的污染情况 试剂污染 (更换新的试剂重新检测评估) 标本污染 (重新采样进行检测,评估标本前处理环节) 设备污染 (设备整体消毒清洁\维护) 产物污染 （全面清洁消毒实验室、仪器设备所有实验有关用品） 针对可能发生的污染情况有的放矢 SZBC 二 核酸实验室污染的判断和预防 合理的核酸实验室分区 合格的实验操作人员 合适的检测试剂和检测平台 严谨、科学的质量管理体系 完善的实验室环境监控措施 SZBC ? 完备的实验室配套设施 ? 血筛核酸实验室仪器设备特点 ： 高自动化 高检测通量 高信息化 提供良好条件预防实验室的污染 ? 严格的管理---可操作性的SOP ? 严格控制进出实验室的人员。严格执行《核酸实验室设置与管理规 范》的管理 ； ? 尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性； ? 核酸实验室医疗废物按《医疗废物管理程序》执行。废液不能在实 验室中倾倒。 ? 扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别 注意实验人员的安全防护。 SZBC 规范的预防措施 ? 将样品和标准品、对照品去掉盖子，按照工作列表插入样 品架避免交叉污染； ? 实验中须使用一次性手套，手套在实验过程中疑有污染应 立即更换，每个区的物品均有明确标示，各室物品不得混 用。 ? 避免因不能戴上手套而用手反复搓揉手套或用口吹胀手套 的行为； ? 实验人员经过全国血液病毒核酸检测培训班培训并取得 上岗证； ? 每天清洁一遍工作台面，每月彻底维护清洁一遍检测系统 （包括分析仪，电脑）； 二 核酸实验室污染的判断和预防 预防为主，严守规程 SZBC SZBC 规范的预防措施 ? 细致的工作流程 ? 正确的上样方式。 ? 正确的试剂装载方式 ? 正确的仪器设备维护方式 ? 正确的医疗废物处理方式 SZBC ?封闭的实验环境 ?方便快捷的试剂装载 ?试剂分配区、样本分配区相互隔离 ?扩增反应管的密封性能 ?实验废弃物收集区相对隔离 SZBC 三 核酸实验室污染的消除 查找可疑污染源 清洁所有可能污染源 更换试剂、耗材 1）实验台面、超净工作 1)回顾检查试剂的存 放和使