2019新型冠状病毒核酸检测规程.pdf

2019新型冠状病毒核酸检测规程 —\标本米集 每个疑似2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)感染的病例必须采集呼吸道标本；重症病例优 先采集下呼吸道标本(如支气管或肺泡灌洗液等)。 标本种类： 1. 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、 深咳痰液。 2, 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、 肺泡灌洗液、肺组织活检标本。 二、标本检测： 2019-nCoV感染的常规检测方法是通过实时反转录聚合 酶 式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction, rRT-PCR)鉴定。推荐选用针对2019-nCoV 基因组中开放读码框 lab (open rea ing frame lab, ORF lab) 和核壳蛋白(nucleocapsi protein, N)基因的引物和探 针。 1.引物和探针序列： 靶标一 (ORFlab): 正向引物(F)： CCCTGTGGGTTTTACACTTAA 反向引物(R)： ACGATTGTGCATCAGCTGA 荧光探针(P)： 5r-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATG G-BHQ1-3 靶标二 (N): 正向引物(F)： GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT 反向引物(R)： CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG 荧光探针(P)： 5-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA- 3 核酸提取和荧光定量RT-PCR反应体系参考相关厂家试 剂盒说明。 2. 结果判断 阴性：无Ct值或Ct为40。 阳性：Ct值 〈37,可报告为阳性。 可疑：Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果 疑值＜ 40,扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则 为阴性。 3. 在实验室要确认一个病例为阳性，满足以下条件： 同一份标本中2019-nCoV 2个靶标(ORFlab、N)特异性 rRT-PCR检测结果均为阳性。 阴性结果也不能排除2019-nCoV感染，需要排除可能产 生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼 吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输 和处理样本；技术本身存在的原因，如；病毒变异，PCR抑 制等。 三 检测方法灵敏度与特异性验证 1. 灵敏性：临床标本稀释IO倍后核酸检测结果仍为阳性; 2. 特异性：2019-nCoV特异性ORFlab和N引物、探针检测 体系与能感染人的其它6种冠状病毒以及流感病毒无交叉反 应。 应急技术中心 2020年1月18日