HepG2细胞培养方法.docVIP

HepG2细胞培养方法 细胞复苏： 材料：HepG2细胞、RPMI-1640、胎牛血清、PS（青霉素+链霉素） 35cm细胞培养瓶、消毒的罗口离心管、消毒的吸管、水浴箱、计时器、离心机、光学显微镜 试剂配制： 100ml完全培养基：90mlRPMI-1640 + 10ml胎牛血清+1支PS，4℃保存 步骤： 1． 罗口离心管加入含10%胎牛血清的完全培养基3ml.。 2． 从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速置37℃水浴1min至融化。 3． 打开冻存管，吸取细胞悬液至离心管，轻轻混匀。 4． 800rpm离心5min,弃上清。 5． 细胞沉淀中加入4ml完全培养基，转入35cm培养瓶37℃常规培养，第二天观察细胞生长情况。 细胞传代与换液： 材料：RPMI-1640、小牛血清、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、PBS、PS、 　　　35cm细胞培养瓶、消毒的罗口离心管、消毒的吸管、水浴箱、计时器、离心机、光学显微镜 试剂配制： 100ml终止液：90mlRPMI-1640 + 10ml小牛血清+1支PS，4℃保存 步骤： 1． 对数增长期汇合度80%-90%的细胞可以传代，4ml PBS清洗两次。 2． 加入0.25%胰酶1ml,37℃孵育5min。 3． 加入3ml终止液，吹打细胞使其脱落并单个化，再移至罗口离心管。 4． 离心5min