动脉粥样硬化课件模板-055(共63).pptVIP

* 《动脉粥样硬化》 课件模板-55 《动脉粥样硬化》：第二节　动脉血管壁细胞组分的提取 第二节　动脉血管壁细胞组分的提取： 一、血管壁细胞提取 1。以无菌术取动脉，立即放入4℃、5%水解乳蛋白Hanks液中漂洗，除去凝血。 2。用小镊剔除外膜纤维、脂肪组织，用剪子沿血管壁纵向剪开血管，用Hanks液洗2次。 3。可先分开内皮细胞和平滑肌细胞，也可不区分两类细胞，将血管切成小块，放入2%胶原酶，温浴12～18h。 《动脉粥样硬化》：第二节　动脉血管壁细胞组分的提取 第二节　动脉血管壁细胞组分的提取： 4。梯度液选择40%～70%，40%梯度液应是4份precoll、1份小牛血清、5份BPS，其他浓度配制与此相同。 5.把密度梯度液按从管底至管口密度梯度逐渐减少的顺序铺入试管，将操作3.细胞液铺于顶层，4kr/min离心，收集各层细胞鉴定。 二、细胞核提取 1。取制备血管细胞悬液放于试管中，加五倍体积缓冲液（10mmol/l TrisHCL,pH7.4含10mol/L NaCl,1.5mmol/L Mgcl2），加1%SDS10 μl用匀浆器轻轻匀浆。 《动脉粥样硬化》：第二节　动脉血管壁细胞组分的提取 第二节　动脉血管壁细胞组分的提取： 2。 加蔗糖液（0.34mol/L,蔗糖10mol/LMgCl2）2份再匀浆1次，下面铺一层0.88mol/L蔗糖，800g离心5min，收集沉淀