过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤模型构建技术规程 DB15_T 1900—2020 内蒙古.pdfVIP

ICS 65.020.30 B 44 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1900—2020 过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤 模型构建技术规程 Technical regulations for establishment of hydrogen peroxide-induced oxidative damage model of bovine mammary epithelial cells 2020-06-10 发布 2020-07-10 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 1900—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本标准主要起草人员：马燕芬、赵磊、吴志红、宋利文、凤英、张春华、乃门塔娜、羿静、宝华、 杜瑞平、高民、米丽。 I DB15/T 1900—2020 过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤模型构建技术规程 1 范围 本标准规定了过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤模型的构建方法。 本标准适用于采用过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞产生氧化损伤模型的构建。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 原代细胞培养 primary cell culture 将乳腺上皮细胞在模拟体内生存环境中进行培养，使细胞生长增殖达到可传代状态的培养方法。 3 工作区条件 工作区由准备室、缓冲间、无菌室、细胞保存室组成。 4 主要仪器、设备及耗材 4.1 主要仪器、设备 超净工作台、CO 培养箱、倒置显微镜、4 ℃离心机、4 ℃冰箱、-20 ℃冰箱、0.22 μ m过滤器、 2 80 目滤网。 4.2 主要耗材 2 25 cm 细胞培养瓶、90 mm细胞培养皿、15mL离心管、300 mL烧杯、250 mL蓝口瓶、1.5mL Eppendof 管、2 mL冻存管、6孔板、24孔板、96孔板、10 μ L-5 mL移液枪及枪头、瓷盘、镊子、剪刀、贮液瓶。 5 主要试剂及配制 5.1 主要试剂 DMEM/F12培养基、10 %胎牛血清、双抗、5 %胰岛素转铁蛋白硒钠、氢化可的松、两性霉素B、表皮 生长因子、催乳素、L-谷氨酰胺、PBS缓冲液 （pH7.4）、0.5 % Ⅱ型胶原酶、10 %二甲基亚砜（DMSO）、 30 %过氧化氢、甲醇、高压灭菌超纯水、0.4 %台盼蓝、75 %酒精、新洁尔灭、0.25 %胰酶、丙酮、10 % 山羊血清、兔抗细胞角蛋白（cytokeratin）18单克隆抗体、山羊抗兔免疫球蛋白G、Alexa Fluor488、 DAPI染液、四氮唑蓝盐化合物（MTS）、细胞裂解液、活性氧（ROS）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、 1 DB15/T 1900—2020 超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒、 谷胱甘肽巯基转移酶（GST）试剂盒、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒