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- 2020-06-16 发布于北京
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因工程
第二章 基因工程技术原理
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因工程
第二章 基因工程技术原理
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第四节 基因定点诱变
2.4.1 盒式诱变
利用一段人工合成
的具有突变序列的
寡核苷酸片段取代
野生型基因中的相
应序列.
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第二章 基因工程技术原理
2.4.2 寡核苷酸引物诱变
使用化学合成的含有突变碱基
的寡核苷酸片段作引物,启动
单链DNA分子进行复制,随后
这段寡核苷酸引物便成为了新
合成DNA子链的一个组成部分。
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因工程
第二章 基因工程技术原理
寡核苷酸引物诱变过程
p正链DNA合成
p突变引物合成
p异源双链DNA分子制备
p闭环异源双链DNA分子富集
p转化
p突变体筛选
寡核苷酸引物诱变法的局限性
n异源双链DNA分子并非真正异源
n突变体子代中突变碱基被错配修
复体系修复
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因工程
第二章 基因工程技术原理
提高寡核苷酸引物诱变突变效率的方法
(1) Kunkel 定点诱变法: 1985年由
T.A.Kunkel发明
ung:尿嘧啶脱糖苷酶
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因工程
第二章 基因工程技术原理
(2) 硫代磷酸诱变法: 已知有些限制酶不能切割
硫代磷酸DNA分子.在异源双链DNA分子
制备时,加入硫代核苷酸,使之掺入突变
链中.然后用前述酶切割,并用外切酶局
部消化后,进行聚合反应,从而产生具有
定点突变的异源双链DNA
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