层析工艺验证PPT.ppt

操作参数的控制 一致性批次生产时，操作参数要在设定点运行而且要确认它们始终在各自规定的范围内。 通常，操作范围窄的设备需要更精细的控制和监测程序。 在工艺的所有阶段都要评价柱层析的参数：平衡、上样、冲洗、洗脱、再生、清洗和保存 层析柱工艺验证 操作参数的控制 建立层析柱时，部分参数就确定了，比如柱高、柱体积和各类填料的柱效。 层析操作时通常还要监测其它的参数，包括流速、保留时间、操作压力、过柱的溶液体积、PH、电导、温度以及工艺时间。例如，采用在线检测来分段收集样品，决定哪部分样品要收集的标准通常是关键操作参数。 并非所有参数都与工艺直接相关，比如说最大操作压力通常受制于层析柱。 层析柱工艺验证 操作参数的控制 下游操作通常要使用各种溶液如工艺缓冲液、病毒灭活溶液和层析柱再生/消毒溶液。溶液参数如PH和电导在制备和保存时可能会变化，但是在使用期间都应该保持在可接受范围内。 溶液必须按照批生产记录进行配制并有适当的过程控制。 层析柱工艺验证 操作参数的控制 提前配制浓缩液，再通过计量泵或比例调节阀来稀释，会使工艺更加复杂且需要额外的监测。 梯度洗脱工艺，在柱前或混合器后通常有额外的传感器来反馈控制，如UV，pH，电导率，或近红外光谱水平。 若工艺要求偏离室温操作，需要监测热交换器两端或中间体储罐的温度。 层析柱工艺验证 层析柱性能监测 一致性批次生产比日常生产需要更多的监测和取样。 层析柱性能通过分析输出参数来监测的（如色谱图，运行记录，完整步骤的确认，收率），以此来保证产品质量和杂质水平在可接受的范围内 层析柱工艺验证 层析柱性能监测 层析用于各种分离，每个分离都应取样分析，证明该步的目的已达到。分析应能证明产品和杂质按照预期进行分离。这对于那些影响最终产品安全性、效价和效力的特定杂质特别重要。因此要证明这些杂质能始终如一地被去除。 层析柱工艺验证 层析柱性能监测 一般认为回顾色谱图是定性，要争取将峰形比较定量化。可以分析几个特征，如保留时间（或体积），峰面积（要在检测器的线性范围内），和峰对称性。穿透上样法测柱效是一个准确且灵敏的工具，用于监测层析柱性能和填料完整性。此外，色谱图出现的任何异常变化都要记录和调查，如峰/谷/双肩的数量和形状。目的是发现和识别层析文件不符常规的地方。由于变化会受到诸如原料等的影响，因此在评价色谱图时要比较定性和定量限度。 层析柱工艺验证 杂质去除 一致性批次验证要证明杂质（如宿主细胞蛋白、DNA）去除到预期水平具有重现性。选择研究杂质要依据研发时定义的该步骤的目的，且要满足与生产规模一样的标准。 层析柱工艺验证 微生物负载和内毒素控制 验证期间，微生物负载和内毒素控制要通过测试每一柱的样品来证明。验证期间的微生物负载和内毒素控制反应层析工艺所用清洗液和保存液的效力，也反应商业设备的清洗和消毒效力。日常生产要设置控制限（或过程控制）。 层析柱工艺验证 小规模验证研究 小规模验证研究包括不能采用生产规模的研究（如病毒去除验证）或不希望采用生产规模的研究（如填料寿命研究）。这些研究可以在生产规模研究的前、中、后进行。 层析柱工艺验证 病毒去除研究 病毒去除研究应证明层析步骤去除和灭活病毒的能力。由于生产设备不适合引入病毒，病毒去除研究采用能代表生产工艺的小规模模型。生产工艺的病毒去除研究，连同原料筛选和适当的产品测试，保证从产品传递到患者的病毒下降到安全水平。迄今为止，还没有来源于细胞系的生物技术产品牵扯到病毒传染中。 层析柱工艺验证 病毒去除研究 病毒去除验证从研发早期开始，到临床III期要求更为严格。 所有选定步骤都要经过适合病毒复制的培养皿测试。 研究要精心设计，可以的话，要研究工艺的最差情况。如果能够证明特定步骤能够充分去除病毒，就不需要评价纯化工艺每个步骤的病毒去除。如果可以，要确定病毒在层析峰中的分布情况，这可增加工艺知识。 层析柱工艺验证 填料寿命研究 填料寿命研究证明填料在预期使用期限内，能够始终保持可接受的性能。该研究先采用小规模预估填料寿命，为大规模生产提供保证。此外在生产规模，要通过验证方案进行长期确认。另一种确认方法是将小规模研究柱子性能的可接受标准纳入日常工艺监控程序。 层析柱工艺验证 填料寿命研究 生产规模寿命研究通常采用统计过程控制和性能属性监测趋势，来核实已验证的操作参数，如最大使用次数和或最长使用期限。 随着重复使用和长期储存，填料性能会发生改变。 层析柱工艺验证 填料寿命研究 影响填料寿命的因素有: 料液性质(杂质的数量和性质)， 所处的工艺阶段（捕获VS精纯）， 填料类型， 工艺条件（包括再生和清洗）， 储存条件 柱子的重装。 层析柱工艺验证 层析柱清洗和再生 层析填料专用于一个产品，然而，批与批之间的携带量应最小化。 多次使用导致填料老化的