动物组织总RNA提取实验操作.pdfVIP

常规动物组织总RNA 提取 (Trizol 法) 实验操作流程 1 摘要 本标准操作规程适用于一般动物组织的总RNA 提取，一般情况下能得到高质量的总RNA 。 2 提取步骤 a) 用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成 粉末。 b) 把样品粉末转入到装有TRIzol 裂解液的2.0mL EP 管中，（每mL 裂解液可加50mg 组 织样品）剧烈震荡，充分混匀，平放室温静置5-10min。 c) 10000rpm，4 ℃离心5min 。 d) 吸取上清液至新的2.0mL EP 管中，每毫升裂解液加入200μL氯仿/异戊醇，剧烈颠倒 混匀。 e) 10000rpm，4 ℃离心10min。 f) 吸取上清液至新的1.5mL 离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入等上清液体积的异 丙醇，轻轻颠倒混匀。 g) 放入-20 ℃冰箱沉淀1h。 h) 13600rpm，4 ℃ 离心20min 。 i) 吸弃上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。 j) 10000rpm，4 ℃ 离心3min