工程科技糖和苷.ppt

一、研究糖链结构的一般程序 ● 纯度鉴定 ▲多糖 的纯度鉴定： 多用 比旋度法 ( 恒定不改变 ) ； 高压电泳法 （硼酸盐缓冲液 PH9-12 ，醋酸薄膜 支 持 ， 显 色 剂 多 为 P- 茴 香 胺 硫 酸 试 剂 ， 即 anisidine/H 2 SO 4 ）。 ▲糖的衍生物 苷 的纯度鉴定： MP 、 TLC 、 HPLC 。 六、糖链的结构测定 一、研究糖链结构的一般程序 ● 分子量测定 ▲单糖、低聚糖及其苷 的分子量测定：目前主要用 MS 法，但由于它们为多羟基化合物，普通 EI-MS 往往测 得的最高质量峰为 M-H2O ，而并非分子离子峰；所 以， 多采用 FD-MS 、 FAB-MS 等。 ▲多糖 的分子量测定：目前仍 沿用经典 高分子化合物分 子量的测定方法，如粘度法、沉降法等，甚至仅仅测 定标示其平均分子量。 六、糖链的结构测定 ● 单糖的鉴定 为了鉴定低聚糖、苷类乃至多糖分子中的单糖种类及 其比例，通常是将其苷键 全部水解 （乙酰解），然 后 经 TLC 、 PC 、 GC 或 HPLC 检出 。 一、研究糖链结构的一般程序 六、糖链的结构测定 ● 单糖间、糖与苷元间连接位置的确定 确定苷键的连接位置，目前主要是应用 13 C-NMR 中 的 苷化位移法 ，其方法是： 将苷化合物或低聚糖先行甲醚化或乙酰化，测得其 13 C-NMR 谱，然后将其水解，再测其水解产物的 13 C- NMR 谱，归属比较其变化，以推断苷键的连接位置。 如： 一、研究糖链结构的一般程序 六、糖链的结构测定 水解前后 △ δ ： C2 29.7 32.0 -2.3 C3 77.0 70.9 +6.1 C4 34.3 38.4 -4.1 因成苷引起的化学位移变化，专业上称之为苷化位移 （ glycosidation shift ）。 ● 糖链连接顺序的确定 ▲经典方法 ：缓和水解；酶解；乙酰解等 这些方法都是将苷部分裂解成次级苷或低聚糖，再 分析鉴定糖的碎片。 虽然经典方法至今尚有一定的实际应用价值，但 日 新月异的波谱技术已正在取代其角色 。 一、研究糖链结构的一般程序 六、糖链的结构测定 ▲ MS 法测定糖链连接顺序 ◆ 技术 → FDMS 、 FABMS 等。 ◆优点 → 不必制备衍生物 , 用量小 , 准确 , 简便。 O O O O O O CH=CHOCO CHOH OH OH OCH 3 OCH 3 OH H CO 3 HO OH 2 3 4 m/z 305 m/z 161 M-305=657 M-161=801 FDMS of marsdekoiside A [M] =962 + ▲ NMR 法测定糖链连接顺序 是将糖及其苷类衍生物全乙酰化后，测定观察 两糖之间质子的远程偶合或 NOE 效应 ，以期确 定糖的连接顺序。 O O O O O O AcOH C 2 AcO AcO AcO AcO AcO AcO AcO H H H H H H 3.89 3.66 ● 苷键构型的确定： ▲ 经典方法： 苷键构型的确定虽然 经典 的 酶水解法、分子旋光法 * （即 Klyne 法） 仍时有应用，但目前 多被 NMR 法所代替 。 一、研究糖链结构的一般程序 第六节 糖链的结构测定 ▲ NMR 法 确定苷键构型：主要是利用成苷 糖的 端基质子 在 δ 5.0 左右，少被覆盖，依 据其 与 C 2 上质子偶合裂分 的不同进行判 断的。如 glucose ： e (5.97) =2.0-3.5Hz 1,2 O HO HO OH OH OR H H J a a a =8.0Hz 1,2 J (5.53) H H OR OH OH HO HO O 四、苷键的裂解 研究苷类的化学结构，必须了解苷元结构、糖的组成、 糖和糖的连接方式，以及苷元和糖的连接方式等。 为此必先使用某种方法使苷键切断。 ㈠酸催化水解反应 ㈡ 乙酰解反应 ㈢ 碱催化水解和 β 消除反应 ㈣ 酶催化水解反应 ㈤ 氧化开裂法（ Smith 降解法） 四、苷键的裂解 ㈠酸催化水解反应 ㈠酸催化水解反应 苷键属于缩醛结构， 易为稀酸催化水解。 水解反应是 苷原子先质子化，然后断键生成阳碳离子或半椅型的中间 体，在水中溶剂化而成糖。 O O R O O R O H O H O OH 2 O H,OH H + + H + - ROH + 阳碳离子 半 椅 式 中间体 + H 2 O + - H + ? 水解的难易程度规律： 1. N- 苷 ＞ O- 苷 ＞ S- 苷 ＞ C- 苷 ( 电子密度升高，质子化能力增强， 水解易发生。如 N 与 C ) 2. N 原子为酰胺或出于嘧啶环上时，则很难水解。 3. 酚苷 （烯醇苷）＞ 醇苷 ? 苷键原子： ?