纯化分离经验.pdfVIP

实用标准文案 硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法： 匀浆法。 1 。称量。 200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍量的硅 胶 H 。干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称 40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。 2 。搅成匀浆。 加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。 如果洗脱剂是石油醚 / 乙酸乙 酯/ 丙酮体系， 就用石油醚拌； 如果洗脱剂是氯仿 / 醇体系， 就用氯仿拌。 如果不能搅成匀浆， 说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯 / 丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预 先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1% 的醇。如果样品对酸敏感， 不能用氯仿体系过柱。 3 。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约 1/3 体积石油醚（氯仿） ，装上蓄液球， 打开柱下活塞， 将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油 醚（氯仿）将其冲入柱中。 4 。压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约 被压缩至 9/10 体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且 可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。 5 。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉 塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。 6 。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐 用梯度洗脱。 收集的例子： 10mg 上样量， 1g 硅胶 H ，0.5ml 收一馏分； 1-2g 上样量， 50g 硅胶（ 200-300 目），20-50ml 收一馏分。 7 。检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一 精彩文档 实用标准文案 般比喷显剂底 1-2 个数量级。 8 。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小 凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱 1.5ppm 左右所谓的“硅胶”峰。 干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入 1-3 倍 的粗硅胶， 晾干或旋干， 干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。 装好的柱子上留一段溶 剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去， 震动柱子或再加一些溶剂， 把粘在柱壁上的硅胶洗下。 在装柱子的时候， 不管是湿法还是干法装， 用节橡皮管边装边敲打， 这样可以把柱子装的比 较匀，只有柱子装得匀，分离效果才能好。 一般的柱子底下的死体积太大，很多分开的物质又重新被合在一起 造成分离失败 Rf 值在多少过柱比较好，还要看分离的化合物的情况。如果产物相对干净，杂质点隔得较 远， Rf 值可以大一点也能分离开，如果杂质点较多， tlc 上距离有比较近的话， Rf 值应该小 一些，最好在 0.1~0.2 。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所 以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分 离，一个柱子几个月也是有的。 减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过 硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结） ，以及有些比较易分解的东西可能得 不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长） 。以前曾经大量的过 减压柱，对它有比较深厚的