免疫细胞分离和功能测定.pptVIP

免疫细胞的分离与功能测定  外周血单个核细胞的分离 原理:密度梯度离 利用密度为.077±0.001g/L淋巴细胞分层 液(聚蔗糖-泛影葡胺)  2000 r/min 血浆 20min 淋巴细胞 分离液 粒细胞 红细胞 ficol分高液法  主要步骤 1无菌采集静脉血,抗凝(每1m全血加01ml125 250U/m肝素溶液) 2用等体积 Hanks平衡盐溶液( HBSS或pH72~74 PBS稀释 3按每10m1稀释血用3~5ml淋巴细胞分层液的比例 擾尺翱槊盆昃窪纓分癆後簋癥洭分陰潑 沿管壁 42000r/min水平离心30min, 吸取分层液与血浆交界部位的单个核细胞,用5倍 体积的HBSS或RPMI-1640洗涤2次依次以2000/min, 1500r/min离心10min 用完全RPM-1640定容,计数 般每ml健康成 人血可分离出1×10~2×10单个核细胞 7台盼蓝染色,检査细胞活性,活细胞应95%  ■注意事项 1严格无菌操作 2操作应轻柔,细胞悬液应充分混匀 3淋巴细胞分层液应4℃避光保存,取出后 待温度升至室温使用 4如须保存血浆作他用,则不能稀释血液 5离心最适温度18~20℃ 6分离组织中的单个核细胞也可采用上法