光合的作用色素含量测定.ppt

叶绿素含量测定  实验目的:掌握未给分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿 a,b含量的方法及其计算。 试验原理:混合液中两种组分存在时,可通过测定吸光 度,根据 Lambert-Beer定律计算 者含量。叶绿素 的最大吸收峰在663ηm,叶绿素b最大吸收峰在645 nm。根据 Lambert-Beer定律,两种组分的混合液, 组分的浓度C与光密度OD之间的关系如下: OD663=Ca Ka663+Cb Kb663 OD645=Ca. Ka645+Cb. Kb645 从文献中查得Ka663为82.04,Kb为9.27;Ka645为 16.75,kbas为45.60 ·通过代数推算,得 Ca=127OD63-269OD645 Cb=229D6454.68OD663 CT=Ca+Cb=802OD63+2021OD645 式中单位为mgL-1。  CC+X=(1000D470-3.27Ca-104Cb) /229 =4.37*D470+2.11*D663-9.1D646  器材与试剂: 实验仪器:高级型分光光度计,离心机, 台式天平,见到,研钵,漏斗,移液管 实验试剂:丙酮,碳酸钙 实验材料:植物叶片。  实验步骤: ·1、色素的提取:取新鲜叶片,剪去粗大的 叶脉并剪成碎块,称取0.3g放入研钵中加 80%丙酮2mL,加适量石英砂及少许碳酸 钙,研磨成匀浆,再加80%丙酮2mL,将 匀浆转入离心管,并用适量80%丙酮洗涤 研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀, 上清液用80%丙酮定容至8mL。 2、测定光密度:取上述色素提取液1mL 加80%丙酮4mL稀释后转入比色杯中,以 80%丙酮为对照,分别测定663nm、645 nm处的光密度值。 3、按公式计算叶绿素a,b及总叶绿素含量 再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中