11《DNA重组技术的基本工具》用[文字可编辑].ppt

限制酶 DNA 解旋酶 区别 限制性酶与 DNA 解旋酶的区别 切割特定的核苷酸序列 的 磷酸二酯键 将 DNA 两条链的 氢键 打开形成两条单链 限制酶 DNA 水解酶 区别 限制性酶与 DNA 水解酶的区别 切割特定的核苷酸序列 的磷酸二酯键，形成 片 段的 DNA. 切割磷酸二酯键，形成 单个的 脱氧核苷酸 。 DNA 聚合酶 DNA 连接酶 区别 1 区别 2 相同点 ? DNA 连接酶与 DNA 聚合酶是一回事吗 ? 为什么 ? 1) 只能将 单个核苷酸 连 接到已有的核酸片段上， 形成磷酸二酯键 形成 磷酸二酯键 1) 在 两个 DNA 片段之 间 形成磷酸二酯键 2) 以 一条 DNA 链为模板 ， 将 单个核苷酸 通过磷酸 二酯键连接成一条互补 的 DNA 链 2) 将 DNA 双链上的 两 个缺口同时连接 起来， 不需要模板 1 . 在基因工程中，切割运载体和含 有目的基因的 DNA 片段，需使用 （ ） A ：同种限制酶 B. 两种限制酶 C ：同种连接酶 D. 两种连接酶 A 课堂练习 基因工程及其应用 假定你是一位知名的育种 专家，某动物园为了迎合观 众猎奇的心理，想请你为他 们培育出下面几只“怪物”， 请问你准备用什么方法？ 怪物 1 怪物 怪物 4 传统的育种方 法能否实现？ 专题 1 基因工程 基因工程 ： 即 。 通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某 种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种 生物的细胞里， 地改造生物的 。 原 理 ： 结 果 ： 基因重组 定向地改造生物的遗传性状， 获得人类所需要的品种。 基因拼接技术或 DNA 重组技术 定向 遗传性状 问题探讨： 苏云金芽孢杆菌含有一 种可以合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在 棉花细胞中表达，可培育出 抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想 需要做哪些关键工作？ 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花 抗虫棉 ? 基因工程培育抗虫棉的简要过程： ? 在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 普通棉花 ( 无抗虫特性 ) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花有抗虫特性 ? 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌 细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花 DNA“ 缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA 连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的 载体 1.1 、 DNA 重组技术的基本工具 1 、基因工程的剪刀 指 “ 限制性核酸内切酶 ” 主要是原核生物 一种限切酶 只能识别 一种特定的核 苷酸序列 , 并使磷酸二酯键断开 已发现的有 4000 多种 种类 : 来源 : 特点 : “ ” 这个特点说明了： 酶具有专一性 O 寻根问底 ? 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是 是什么吗？ 原核生物易受自然界外源 DNA 的入侵 ， 但生物在长期的进化过程中形成了一套完善 的防御机制，以防止外来病原物的侵害。 限 制酶 就是细菌的一种 防御性工具 ，当外源 DNA 侵入时，会利用限制酶 将外源 DNA 切割 掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原 核生物中主要起到切割外源 DNA 、 使之失效 ， 从而达到 保护自身 的目的。 ⒉种类与命名： 现在已经从约 300 种微生物中分离出了约 4000 种限制性内切酶 ( 限制酶 ) 。 E co R Ⅰ S ma Ⅰ 粘质沙雷氏杆菌 （ Serratia marcesens ） 大肠杆菌 （ Escherichia coli R ） 练习：流感嗜血杆菌的 d 菌株 ( Haemophilus influenzae d ) 中先后分离到 3 种限制酶， 则分别命名为 : Hin d Ⅰ、 Hin d Ⅱ和 Hin d Ⅲ ? 限制酶的识别序列： 能被限制性内切 酶特异性识别的 切割部位都具有 回文序列 ： 在切割部位，一 条链 正向 读的碱 基顺序与另一条 链 反向 读的顺序 完全 一致 。 EcoR Ⅰ ? 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的 DNA 两条单链的切口， 带有几个 伸出的核苷酸 ，它们之间正好 互 补配对 ，这样的切口叫 黏性末端 。 Sma Ⅰ 平末端 平末端 ? 要想获得某个基因必须要用限制酶切几个切 口？可产生几个黏性 ( 平 ) 末端？ 要切两个切口，产生四个黏性 ( 平 ) 末端。 ? 如果把两种来源不同的 DNA 用同一种限制酶 来切割，会怎样呢？ 会产生 相同的黏性 ( 平 ) 末端 ，然后让两 者的黏性 ( 平 ) 末端 黏合 起来，就似乎可以合 成重组的 DNA 分子了。 思考 ? …… GAATT