细胞膜渗透率测定.pptVIP

实验细胞膜渗透率的测定 日的 了解测定果蔬细胞膜渗透率的意义,果蔬 成熟衰老或受到外界环境影响是细胞膜渗透 率变化规律,掌握果蔬组织细胞膜渗透率的 !定原理和方法。  果蔬细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。细胞膜 具有选择透过性功能,果蔬细胞之间以及细胞与外界环境之间发生的一切物 质交换都必须通过质膜进行。果蔬组织后熟衰老过程屮,细胞质膜功能活性 膜通透性增加,出现细胞内电解质向外滲漏。植物组织在受到各种 利的环境条件(如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染)危害时,细胞膜的 构和功能首先受到伤害,细胞膜透性增大。若将受伤害的组织浸入无离子 水中,其外渗液中电解质(主要是钾离子)的含量比正常组织外渗液中含量 增加,组织受伤害越严重,电解质含量増加越多。通过测定果蔬组织浸提液 或外渗液的电导率,可以了解果蔬细胞膜通透性变化,反映果蔬抗逆性强弱 或受到伤害的程度。一般利用相对电导率表示细胞膜滲透率以及细胞膜受到 伤害的程度。 在电解质外渗透的同时,细胞内可溶性有机物也随之渗出,引起外渗液 可溶性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加,氨基酸和核苜酸对紫外光有吸收, 用紫外分光光度计测定受伤害组织外渗液消光值,同样可反映出质膜受伤害 的程度 用电导仪法和紫外法测定结果有很好的一致性。  材料与仪器设备 1.材料 低温处理过的黄瓜、番茄。 去离子水。 2仪器设备 DDS11A型电导仪;751——型紫外分光 光度计;真空泵;真空干燥器;三用水浴 打孔器;剪刀;洗瓶;试管;移液管;玻 棒;滤纸  四、方法与步骤 1清洗器具:由于电导仪变化非常灵敏,稍有杂质即产生很大误差。因 此所用玻璃器具均需先用热肥皂水洗,再用洗液洗涤,然后用自来水、 离子水各冲四到五遍(最好是容器口朝下用水冲 洗净的试管 离子水,用电导仪测定电导值,检查试管是否确实冼净 2取样及处理:自购样品,设计不同贮藏条件,作为处理 器及 切片器将样品制成厚薄均匀, 致的组织圆片,精确称取2(或 圆片),放入试管内,用去离子水冲洗三次,然后加入20mL去离 子水。对照和处理均设3~4个重复 将试管放入真空「燥器内,开动真空泵抽气1mn,压力控制在 0.040.06MPa,以抽出细胞间隙空气。缓慢放入空气,水即渗入细胞 间隙,组织圆片变成透明状,细胞内溶质易于滲出,取出试管,间 儿分钟振荡 3.测定:将DDs—11A型电导仪电极插入试管,测定外渗液的电导值。 测定之后,将试管放入水浴锅沸水中5min以杀死组织。待冷至室温后 再次测定外渗液的电导值。  五.计算 以细胞膜相对透性大小表示细胞受害的程度。通常 式中:L1—组织杀死前外渗液的电导值;L2—组织 杀死后外渗液的电导值 细胞膜相对透性(%)=L1/L