琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响.docxVIP

琼脂糖凝胶电泳中 DNA 分子迁移率受哪些因素的影响 1、DNA  的分子大小及构型 不同构型 DNA 的移动速度次序为：供价闭环 DNA （covalently closed circular  ， cccDNA ）直线 DNA 开环的双链环状 DNA 。线状双链 DNA 分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与 DNA 分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行， 因而迁移得越慢。 当琼脂糖浓度太高时， 环状 DNA （一般为球形）不能进入胶中，相对迁移率为 0（Rm=0 ），而同等大小的直线双链 DNA （刚性棒状）则可以长轴方向前进（ Rm0 ），由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度。 2、琼脂糖浓度 一个给定大小的线状 DNA 分子 ,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。 DNA 电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于 DNA 分子的大小。分离小于 0.5kb 的 DNA 段所需胶浓度是 1.2-1.5%, 分离大于 10kb 的 DNA 分子所需胶浓度为 0.3-0.7%, DNA 段大小间于两者之间则所需胶浓度为 0.8-1.0% 。 3、DNA 分子的构象 DNA 分子处于不同构象时 ,它在电场中移动距离不仅和分子量有关 ,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋 DNA 在琼脂糖凝胶中